高效液相色谱法测定抗饥消渴片中盐酸小檗碱的含量

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　　摘要：目的：制定抗饥消渴片中盐酸小檗碱的含量控制标准。方法：采用高效液相色谱法对方中的盐酸小檗碱进行含量测定，采用Discovery C18 4.6mm×150mm，流动相：乙腈-水-三乙胺-36%醋酸（30.5：69.5：0.9：1.1），检测波长346nm。结果：在0.14643～2.4410μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系。平均回收率为98.9％（n=6），RSD 1.2％。结论：该方法简便，准确。
　　关键词：高效液相色谱法；抗饥消渴片；盐酸小檗碱；含量测定
　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2008)04-0863-02
　　
　　抗饥消渴片由红参、黄连、黄柏、地黄等9味药组成，具养阴益气、润燥生津、抗饥止渴等功效[1]，黄连、黄柏为方中主药，其有效成分主要为盐酸小檗碱[2]，为控制产品质量，保证疗效。本文建立了分离度良好，重现性较好，阴性液无干扰的盐酸小檗碱高效液相分析方法，现将研究结果报道如下。
　　
　　1材料与仪器
　　
　　岛津2010高效液相色谱仪；UV-265 紫外分光光度仪，乙腈（天津四友生物医学技术有限公司 色谱纯），盐酸小檗碱（中国药品生物制品检定所批号 110713-200609 纯度为98.1％含量测定用），抗饥消渴片（沈阳中药制药有限公司），其它试剂为分析纯。
　　
　　2方法与结果
　　
　　2.1供试品溶液的配置
　　2.1.1对照品溶液的配置精密称取盐酸小檗碱对照品12.5mg，置50mL量瓶中，加1%盐酸甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取上述溶液1mL，置10mL量瓶中，加1%盐酸甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
　　2.1.2样品供试液的制备取本品10片，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入1%盐酸甲醇溶液25m1，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用1%盐酸甲醇溶液补足减失的重量，取上清液，即得。
　　2.1.3阴性样品的制备按处方比例，以样品生产方法制备缺黄连、黄柏的抗饥消渴片，照样品供试液制备方法制备阴性供试液。
　　
　　2.2检测波长的选定
　　将对照品盐酸小檗碱适量溶于1%盐酸甲醇中，进行光谱扫描，在346nm波长处有最大吸收，故选定346nm为盐酸小檗碱的检测波长。
　　
　　2.3色谱条件
　　色谱柱：Discovery C18 4.6mm×150 mm，流动相：乙腈-水-三乙胺-36%醋酸（30.5：69.5：0.9：1.1），检测波长：346nm，在此色谱条件下，盐酸小檗碱可与其它成分基线分离，阴性组分无干扰，结果见图1～3。
　　
　　
　　
　　2.4线性范围的考察
　　精密吸取对照品溶液5mL置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液C1=0.04881mg/mL、3μL、5μL、10μL，C2=0.2441mg/mL 3μL、5μL、10μL注入液相色谱仪中，按前述色谱条件在346nm波长处测定，结果以进样量为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经回归处理，方程为Y=4274316X+27111，r=0.9999,可见，盐酸小檗碱进样量在0.14643～2.4410μg范围内，线性关系良好。
　　
　　2.5仪器精密度试验
　　精密吸取同一供试品溶液10μL，按上述色谱条件，连续进样6次，测定色谱峰面积，计算RSD值为1.0％，表明仪器精密度良好。
　　
　　2.6稳定性试验考察
　　精密吸取同一供试品溶液10μL，按0、2、4、6、8、12h时间间隔进行分析，测定色谱峰面积，计算RSD值为0.7％，显示，供试品溶液制备后12h内测定，盐酸小檗碱色谱峰面积无明显变化，说明在此时间内，供试品溶液化学性质稳定。
　　
　　2.7重复性试验
　　取同一批号的6份样品供试液，测定含量进行分析，结果平均含量为1.6422mg/片，RSD为0.8％，表明本测定方法重复性良好。
　　
　　
　　2.8加样回收率试验考察
　　取已知准确含量（5.3755mg/g）的样品，加入盐酸小檗碱对照品溶液（c=0.1464mg/mL）4mL按样品含量测定方法操作，测定结果见表1。
　　结果表明：本方法回收率良好。
　　
　　2.9样品含量测定
　　依据含量测定的方法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表2。
　　
　　
　　3讨论
　　
　　抗饥消渴片含药味较多，其质量控制存在一定的难度，黄连、黄柏为方中主药，测定其主要有效成分盐酸小檗碱含量对于控制本品质量，更好的保证临床疗效，具有主要意义。
　　文献报道盐酸小檗碱的含量测定方法有有紫外分光光度法、高效液相色谱法[3]，薄层扫描法，本文建立的方法具有样品处理简单，本品含量测定理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000时，样品分离良好。
　　本实验比较了超声20、30、40min不同时间盐酸小檗碱的提取率，结果30min提取的得率与40min的相同，因此确定提取时间为30min。
　　
　　参考文献
　　[1]国家药典委员会.中国药典2000年版一部[S].北京：化学工业出版社，2000：250-251.
　　[2]国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分分析[M].北京：人民卫生出版社，1986：120-122.
　　[3]袁梦哲，许伟华.盐酸小檗碱片含量的测定方法的改进[J].中国药事，2007，21(1)：57.
　　[4]朱颖虹.三黄片中盐酸小檗碱含量测定[J].中成药，2004，24（1）：29.
　　[5]李虹，林杰.荧光扫描法测定湿热癖颗粒中盐酸小檗碱含量测定[J].时珍国医国药，2005，112（16）：24.

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