HE染色和巴氏染色两种不同方法在宫颈液基细胞检查中应用价值
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【摘 要】 目的：探索HE（Haematoxylinandeosin）染色和巴氏染色两种方法处理宫颈液基细胞学检查（TCT）中应用价值。方法：选取我院2017年1月-2018年12月2000例宮颈液基细胞学检查（TCT）制片，平均分成两组，分别用HE染色和巴氏染色，按照TBS分类，ASC-H及以上判读为阳性、ASC-H及以上阴道镜活检、比较两组染色方法处理宫颈TCT检查的阳性率与病理活检诊断符合率。结果：巴氏染色组TCT细胞学阳性率为4.7%、与病理活检诊断符合率为77.3%，HE染色组TCT细胞学检查阳性率为4.5%、与病理活检诊断符合率为76.7%。结论：两种染色方法在液基细胞学（TCT）检查中应用价值无明显差异、我们可以根据医院的条件合适选择这两种方法中一种应用于宫颈液基细胞学检查。
【关键词】 液基细胞学;巴氏;H-E染色;应用价值
【中图分类号】R365【文献标志码】A【文章编号】1005-0019（2019）09-219-02
宫颈癌是我国女性健康的重要杀手、从癌前病变转变成癌有一个过程、一般所需10年左右、因此早癌筛查很重要，而液基细胞学（TCT）检查是目前国际上较先进的一种宫颈癌细胞学检查技术，检出率为100%，在宫颈病变诊断中普及，改变了传统手工涂片的方法，制片效果好，利于观察，阳性检出率高，是应用于妇女宫颈癌筛查的一项先进的技术[1]。宫颈细胞学的常用染色方法以巴氏染色，HE染色为主，效果各有优劣。比较两种染色方法，分析各自的优缺点，便于在工作中选择合适的染色方法。
1 材料与方法
1.1 仪器材料
我院TCT采用武汉呵尔医疗科技发展有限公司的薄层液基细胞涂片试剂盒（细胞保存液），细胞保存液I型，规格15ml/瓶人份，保存条件4℃-30℃保存。细胞保存液I型成分为：无水乙醇﹑氯化钠和去离子水等，I型主要用于宫颈癌筛查，对取得的宫颈细胞进行固定和保存。
H-E 染色，其染液用苏木素染色液采用Harris液为珠海贝索生物技术有限公司生产的。伊红（水溶性）为珠海贝索生物技术有限公司生产的。按《临床技术操作规范》病理学分册介绍的方法自行进行染液配制。
1.2 取材与制片方法
取材方法：将宫颈充分暴露以后，用一次性宫颈刷采集宫颈细胞标本，大拇指和食指捏住刷柄，将宫颈刷伸入到宫颈口内，顺时针旋转3-5圈，抽出宫颈刷，卸下刷头放入装有15ml的细胞保存Ⅰ液的小瓶中。从而成功提取宫颈处的表皮细胞，在这里值得注意的是，（如果病人宫颈上的粘液或分泌物较多，应先用棉球将该粘液或分泌物提前擦拭一下后再取样）。
液基细胞制片，妇科取材保存于细胞保存液中送检。通过95%酒精固定30min，水冲洗，分别用巴氏、HE两种染色法。
巴氏染色：液基细胞涂片置苏木素染液浸染3min，水冲洗，盐酸酒精分化5s，水冲洗碱水反蓝，95%酒精2min，EA-50染色2min，95%酒精第一次lmin，95%酒精第二次lmin，100%酒精第一次2min，100%酒精第二次5min，二甲苯1～2min，中性树胶封固[2]。
HE染色：浸入苏木素染液浸染10～15min，水冲洗30s～1min，1%盐酸酒精分化30S，流水冲洗15min，1%伊红染色3～5min，水冲洗，90%～95%酒精第一次分化30s，95%酒精第二次1min，95%酒精第三次分化1min，100%酒精第一次分化2min，100%酒精第二次分化5min，二甲苯1～2min，中性树胶封固。
2 结果
巴氏染液染出的涂片， 其细胞透明度好， 细胞核结构清新， 胞质色彩丰富而鲜艳。染色结果：细胞核呈深蓝色，核仁呈红色;不同分化类型的鳞状上皮细胞，其胞质染色颜色不一。
HE（Haematoxylinandeosin）染色：苏木素染色后的细胞核呈现蓝色，染色透明度好，核与胞质对比鲜明、红蓝适度。两组染色方法处理宫颈TCT诊断均按照TBS分类、ASC-H及以上判读为检查阳性。巴氏染色组诊断ASC62例（ASC-H8例、ASCUS54例）、LSIL26例、HSIL10例、SCC3例，HE染色组：ASC50例（ASC-H7例、ASCUS43例）、LSIL29例、HSIL7例、SCC2例，两组染色方法处理TCT诊断结果与病理活检诊断结果符合情况如下表由上述得出结果：巴氏染色组处理TCT检查阳性率4.7%（47/1000）、HE染色组处理TCT检查阳性率4.5%（45/1000），巴氏染色组处理宫颈TCT阳性病例与病理组织学诊断符合率77.3%（34/46）、HE染色组处理宫颈TCT检查阳性病例与病理组织学诊断符合率76.7%（33/43），通过两组染色方法处理宫颈TCT检查阳性率及病理组织学诊断符合率对比分析、发现宫颈TCT检查阳性率及与病理组织学诊断符合率、两种染色方法无统计学差异。
3 讨论
宫颈液基薄层细胞学检查技术是细胞学诊断的一场革命，它通过技术处理去掉涂片上的杂质，直接制成清晰的薄层涂片，液基薄片背景中细胞分布均匀、重叠现象较少、细胞形态保存完好、细胞不容易退变（与传统涂片相比）、使阅片者更易观察，它由于更全面、也更实用、更具有临床应用价值，其诊断准确性比传统的细胞涂片要高[3]，目前在我国大部分地区已开始应用起来。
涂片的正确诊断除了与涂片质量、涂片固定有关外，与染色的好坏关系密切，染色的好坏很影响观察[4]HE（Haematoxylinandeosin）染色的特点，首先染液的渗透性强，染色透明度好，核浆对比鲜明，操作简便、核仁清晰;再者宫颈阴道为非角化复层鳞状上皮，H-E染色后的细胞涂片更易与组织切片相对照[5].其次，当HE（Haematoxylinandeosin）染色不理想时，还能进行弥补，如染色较浅，可分别进行苏木素及伊红复染;如用苏木素使涂片染色过深，后用盐酸酒精处理，直到背景干净，至满意为止，最后H-E染色液也可以重复使用，直至认为效果不佳时再换用新的染色液，缺点：胞质染色颜色单一、胞核内部结构不够清晰、不利于没有经验的诊断医师阅片。巴氏染色背景干净、细胞质染色颜色不一、丰富而鲜艳、胞核深蓝色、胞核与胞质对比度明显、胞核内结构清晰、核仁清晰、尤其是染色质粗细情况更为能够保证HPV感染引起的细胞嗜异染和双染以及异常角化方面给予更多信息表达，缺点：染色成本较高，工作步骤繁多，而宫颈液基细胞学检查（TCT）TBS判断标准是根据细胞核大小、细胞核异型、细胞核染色质粗细、核仁情况、核浆比来判断将鳞状上皮分为未见上皮内病变（NILM）、非典型不明确意义鳞状上皮（ASC，包括ASCUS、ASC-H）、低级别上皮内病变（LSIL）、高级别上皮内病变（HSIL）、鳞状细胞癌（SCC）。从这个角度两种染色方法都能满足液基细胞学检查诊断需要;从本文随机选取的2000例平均分成两组、检查阳性率4.7%和4.5%，在与病理组织学诊断符合率77.3%和76.7%、两组无显著的统计学差异。我们在实践工作中可以根据医院的具体情况来选择巴氏染色方法和HE染色方法处理宫颈液基细胞学检查。
参考文献
[1] 朱燕燕，怀建国，蒋艳.细胞DNA定量分析结合液基细胞学检测在肺癌诊断中的价值[J].临床与实验病理学杂志，2016，32（5）：92-97.
[2] 王俊生.探讨HE染色方法在临床病理诊断中的应用价值[J].世界最新医学信息文摘，2016，16（68）：96-97.
[3] 王莹 卞美璐主编 液基薄层宫颈细胞学图谱[M]，第一版 科学技术文献出版社团组织，2005，11-14。陈乐直，主编。妇产科诊断病理学[M]，第1版。，北京：人民军医出版社，2002。478-503。
[4] 廖秦平 宫颈癌病因学研究新进展[J]，中国妇产科临床杂志，2003，4（4）：243-245。
[5] 于芳，李纯.DakeweDP260全自动智能染色机在细胞染色中的使用体会[J].诊断病理学杂志，2017（3）：52-53.
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