HPLC法测定参麦地黄丸中毛蕊花糖苷含量的研究

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　　【摘 要】 目的：建立测定参麦地黄丸中毛蕊花糖苷的含量测定方法。方法：采用HPLC法，流动相为乙腈-0.1%冰醋酸溶液（14∶[KG-*3/5]86），色谱柱为ChromCoreTMC18（5μm，4.6×250mm），流速1.0mL·min-1，检测波长为334nm，柱温30℃，进样量20μL。结果：毛蕊花糖苷在2.13～106.4μg/mL范围内呈现良好的线性关系（r=0.9992），平均加样回收率在97.63%，RSD为0.63%。结论：该方法准确可靠，且重现性好，为参麦地黄丸质量标准研究提供参考。
　　【关键词】 参麦地黄丸;毛蕊花糖苷;HPLC;含量测定
　　【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）4-0032-03
　　Application of HPLC in the Verbascoside Content Determination of ShenmaiDihuang Pills
　　SHE Xuehua PAN Xin*
　　School of Pharmacy，Fujian University of Traditional Chinese Medicine ，Fuzhou350122，China
　　Abstract：Objective To establish a method for the Verbascoside content determination in Shenmai Dihuang Pills.Methods High performance liquid chromatography method was used with Chrom CoreTMC18（250mm×4.6mm，5μm）.The mobile phase was a mixture of acetonitrile-water（0.1%） glacial acetic acid（14∶[KG-*3/5]86）.Flow rate was 1.0mL/min ，the detection wave length at 334nm，.Column temperature was 30℃and sample loop volume was 20 μL.Results The calibration curve was linear within the range of 2.13～106.4μg/mL of Verbascoside（r=0.9992），the average recovery rate was 97.63%，RSD was 0.63%.Conclusion The method isprecise and reliable，which can be used for the quantitation control of Shenmai Dihuang Pills.
　　Key words：ShenmaiDihuang Pills;Verbascoside;HPLC; Content Determination
　　参麦地黄丸始载于清代张秉成《成方便读》，是补益剂中补阴剂的代表方，由熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、茯苓、牡丹皮、麦冬、北沙参八味中药组成[1]。参麦地黄丸具有养阴润肺之功效，临床上主要用于肺肾两虚、咳嗽气喘、咽干口燥[2-3]。其中，熟地黄滋肾填精为主药，毛蕊花糖苷常被作为熟地黄质量控制的指标性成分，具有抗氧化、增强免疫功能等作用[4-5]。目前参麦地黄丸质量标准仅有丸剂的常规制剂检查项，缺少有效成分的含量控制[1]。为更好控制参麦地黄丸的质量，本研究建立了HPLC法测定其毛蕊花糖苷含量，以期进一步提高参麦地黄丸的质量标准。
　　1 仪器与材料
　　1.1 仪器 日本岛晶LC-20AT高效液相色谱仪;在线脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、DAD检测器、LCsolution工作站（岛晶制造）;数控超声波清洗器KQ-500DE型（昆山市超声仪器有限公司）;OHAUS型万分之一电子分析天平（奥豪斯仪器（常州）有限公司）;Milli-Q超纯水系统（美国，Millipore公司）。
　　1.2 材料 参麦地黄丸由福州海王金象中药制药有限公司生产提供（批号：1905071、1905072、1904162、1905081、1904152）;毛蕊花糖苷对照品（批号：AF8051802），购自成都埃法生物科技有限公司;乙腈为色谱纯（天津市福晨化学试剂厂），冰醋酸为分析纯（天津市福晨化学试剂厂），水为自制超纯水，其余试剂均为分析纯（天津市福晨化学试剂厂）。
　　2 方法与结果
　　2.1 溶液的制备
　　2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取毛蕊花糖苷2.66mg，置于25mL容量瓶中，加流動相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液。再精密量取1mL置10mL容量瓶中，加流动相定容至刻度，配制成10.64μg/mL对照品溶液。
　　2.1.2 供试品溶液的制备 取本品细粉约10g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇100mL，称定重量，加热回流30min，放冷，用甲醇定容，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50mL，减压回收溶剂近干，残渣用流动相溶解，转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
　　2.1.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取参麦地黄丸处方饮片（除熟地外），按照制备工艺制成参麦地黄丸缺熟地的阴性样品，并按上述供试品溶液制备方法，制成阴性对照溶液。
　　2.2 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Chrom Core TMC18 （5μm，4.6×250mm）;流动相：乙腈-0.1%冰醋酸溶液 （14∶[KG-*3/5]86）;流速：1.0mL/min;柱温：30℃。检测波长：334nm;进样量：20μL。理论塔板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000[6]。 　　2.3 专属性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按“2.2”项下方法进样分析，在该色谱条件下，供试品中毛蕊花糖苷与对照品色谱峰保留时间一致，与相邻峰的分离度大于1.5，阴性对照品溶液未见该峰，说明阴性无干扰。色谱图见图1。
　　2.4 线性关系考察 分别精密量取“2.1.1”项下对照品储备液0.2mL、1mL、4mL、6mL、8mL置10mL容量瓶，用流动相稀释至刻度，配制成2.13μg/mL、10.64μg/mL、42.56μg/mL、63.84μg/mL、85.12μg/mL的浓度。按“2.2”项下方法测定，以峰面积（mAU）为纵坐标，相应的毛蕊花糖苷对照品浓度（μg/mL）为横坐标进行线性回归，得回归方程：y=30347x+135606，r=0.9992。毛蕊花糖苷在2.13～106.4μg/mL范围呈线性关系。
　　2.5 精密度试验 取对照品溶液，连续进样6次，按“2.2”项下色谱条件测定，测得毛蕊花糖苷峰面积的RSD为1.47%，表明仪器精密度良好。
　　2.6 稳定性试验 取同一批号参麦地黄丸供试品溶液室温下放置，分别于0，2，4，8，12，24 h，按“2.2”项下色谱条件进样，测定毛蕊花糖苷峰面积，计算RSD为1.77%。表明供试品溶液中毛蕊花糖苷在24h内稳定。
　　2.7 重复性试验 取同一批号参麦地黄丸（201904152），称取5份，每份约10g，精密称定，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样。测得毛蕊花糖苷平均含量为0.0474mg/g，RSD为1.56%。表明该方法重复性良好。
　　2.8 加样回收率试验 取已知含量的同一批号参麦地黄丸（201904152），采用加样回收试验，精密加入一定量毛蕊花糖苷对照品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，计算回收率。结果毛蕊花糖苷平均回收率（n=6）为97.63%，RSD为0.63%。表明本法具有较好的加样回收率。见表1。
　　2.9 样品含量测定 取5批样品（批号：1905071、1905072、1904162、1905081、1904152），按“2.1.2”項下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，并计算含量，样品含量测定结果见表2。
　　3 讨论
　　熟地黄为参麦地黄丸的主药，熟地黄中有效成分含量直接关系到药品的疗效。2015版《中国药典》将毛蕊花糖苷作为评价熟地黄的指标性成分，规定其含量不少于0.020%[7]。故本实验通过建立HPLC法测定参麦地黄丸中毛蕊花糖苷含量。在对毛蕊花糖苷的分离试验中，考察了乙腈—水、乙腈-磷酸溶液、乙腈-冰醋酸溶液为流动相进行测定，发现流动相为乙腈-0.1%冰醋酸溶液（14∶[KG-*3/5]86），分离效果较好。对毛蕊花糖苷对照品溶液进行扫描，在334nm波长处有最大吸收，故以334nm为检测波长。本研究通过测定参麦地黄丸中毛蕊花糖苷的含量，为本制剂的质量控制提供依据，后期课题组将继续研究其他成分含量测定，以不断提高参麦地黄不同制剂的质量标准。
　　参考文献
　　[1]卫生部药典委员会.卫生部颁标准（中药成方制剂第二册）[S].北京：卫生部药典委员会出版社，1990：149.
　　[2]丁奕健，宋杭.参麦地黄丸治疗肾阴虚证慢性牙周炎40例[J].浙江中医杂志，2017，52（11）：811-812.
　　[3]张霞，李辉，李亮，等.支气管哮喘慢性持续期中医临床表型探索[J].世界科学技术-中医药现代化，2017，19（9）：1517-1521.
　　[4]关皎，朱鹤云，王莹，等.双波长UFLC法同时测定地黄中梓醇和毛蕊花糖苷的含量[J].影像研究与医学应用，2017，1（15）：224-225.
　　[5]郑帅，杨敏.毛蕊花糖苷治疗糖尿病肾病的研究进展[J].医学综述，2018，24（16）：3232-3236，3241.
　　[6]曹卫宾，李更生，王慧森，等.地黄药材及其指纹图谱研究进展[J].中医研究，2011，24（4）：76-80.
　　[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].1部.北京：中国医药科技出版社，2015：27-28.
　　（收稿日期：2019-11-25 编辑：刘 斌）
　　基金项目：福建省科技厅福建省高校产学合作项目（项目编号：2019Y4008）。
　　作者简介：佘雪花（1989-），女，汉族，硕士，主管药师，研究方向为中药制剂及质量标准研究。E-mail：742912622@qq.com;
　　通信作者：潘馨（1964-），女，汉族，本科，研究员，研究方向为中药制剂及质量标准研究。E-mail：358317515@qq.com
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