HPLC法测定伤风停胶囊中欧前胡素的含量
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【摘 要】 目的：建立采用高效液相色谱法测定伤风停胶囊中欧前胡素含量的方法。方法：色谱柱为Thermo Hypersil Gold-C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（50：50），流速1.0mL·min-1，柱温35℃，检测波长为300nm。结果：欧前胡素在0.87～10.46μg·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为102.42%（RSD=1.11%）。结论：所建立的方法结果准确，专属强，重现性好，可用于测定伤风停胶囊中欧前胡素的含量。
【关键词】 伤风停胶囊;欧前胡素;高效液相色谱;含量测定
【中图分类号】R284 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）5-0032-03
Determination of imperatorin in Shangfengting Capsules by HPLC
ZHANG Jie HE Yan*
School of Pharmacy，Xiang Nan University，Chenzhou 423000，China
Abstract：
Objective To establish a method of determining imperatorin in Shangfengting Capsules by HPLC. Methods The samples was separated on the column Thermo Hypersil Gold-C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm），which the mobile phase was consisted of acetonitrile and 0.1% phosphoric acid at 50：50. The flow rate was 1.0 mL·min-1. The column temperature was set at 35 ℃，and the detection wavelength was 300 nm. Results A good linearity of imperatorin was in the range of 0.87～10.46 μg·mL-1 （r=0.9999） and the average recoveries was 102.42%（RSD=1.11%）for imperatorin. Conclusion The method is special，repeatable and the results were accurate，and can be applied in the content determination of imperatorin in Shangfengting Capsules.
Key words：Shangfengting Capsules; Imperatorin; HPLC;Content determination
伤风停胶囊由麻黄、荆芥、白芷、苍术（炒）、陈皮和甘草组成的复方制剂，现行质量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制劑第十三册中，具有发散风寒之功效，用于外感风寒、头痛、鼻塞肢体酸重等症状。方中白芷具解表散寒、宣鼻通窍之功效，主治风寒表证、头痛、痹痛、鼻塞不通等症;欧前胡素是白芷中含有的主要香豆素类成分，具抗炎、抗菌、镇痛等药理作用[1-3]。《中国药典》2015年版一部收载的白芷质量标准中采用HPLC法测定欧前胡素作为评价指标[4]，而伤风停胶囊现行质量标准[5]中白芷药材的质量控制仅采用薄层鉴别，无含量测定项，无法有效控制其质量。为此，本实验建立HPLC法测定伤风停胶囊中欧前胡素含量的方法，此法结果准确，重现性好，为有效控制该制剂的质量提供科学依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪（美国Agilent公司），AUW-220D电子天平（岛津公司，感量：0.01mg），电热恒温水浴锅（北京市永明医疗仪器有限公司），超声清洗器（昆山超声仪器有限公司）。
1.2 试药 伤风停胶囊（云南A厂家，批号：WXCC1802、WXFA1705和WXEC1805），欧前胡素对照品（中国食品药品鉴定研究院，批号：110862-201616，纯度：99.6%）。甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂、试药均为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为Thermo Hypersil Gold-C18（4.6mm×250mm，5μm）;流动相为乙腈- 0.1%磷酸（50∶50），检测波长300nm;流速1.0mL·min-1，柱温35℃，进样量10μL。在上述色谱条件下，欧前胡素与其他色谱峰分离较好，且阴性样品无干扰。结果如图1所示。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取欧前胡素对照品适量，置100mL量瓶中，用70%甲醇溶液定容至刻度，得欧前胡素对照品储备溶液（17.44μg·mL-1）。
2.3 供试品溶液的制备 取伤风停胶囊样品适量，研细，取约1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入70%甲醇溶液50mL，称定重量，超声提取40min，放冷至室温，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
2.4 阴性样品溶液的制备 取按处方工艺制成不含白芷的阴性样品适量，研细，按“2.3”项下方法制成缺白芷的阴性样品溶液。 2.5 线性关系考察 精密量取“2.2”项下的对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、5.0、6.0mL，分别置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪中，按“2.1”项下色谱条件测定其峰面积，以进样质量浓度（μg·mL-1）为横坐标（X），峰面积（A）为纵坐标（Y），进行线性回归。欧前胡素在0.87～10.64μg·mL-1范围内线性关系良好，回归方程为Y=25.762X+0.181，r=0.9999。
2.6 精密度试验 精密吸取欧前胡素对照品溶液10μL，注入液相色谱仪中，连续进样6次，测得其峰面积并计算，欧前胡素峰面积的RSD为0.65%，结果表明仪器的精密度良好。
2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品（批号：WXCC1802）溶液10μL，分别在0、2、4、6、10、18h依次进样，测定其峰面积并计算，欧前胡素峰面积的RSD为0.70%，结果表明供试品溶液在18h内稳定性良好。
2.8 重复性试验 精密称取同一批样品（批号：WXCC1802）6份，照“2.3”项下制备，得供试品溶液，进样10μL依法测定峰面积，欧前胡素含量为0.1339mg·g-1，RSD为1.14%（n=6），表明该方法重复性较好。
2.9 加样回收率试验 取已知含量的样品（批号：WXCC1802）6份，各約0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入50mL含欧前胡素（1.308μg·mL-1）对照品溶液，按“2.3”项下方法，制备供试品液，进样10μL，测定欧前胡素含量，计算回收率，结果欧前胡素平均回收率102.42%，RSD= 1.11%。结果见表1。
2.10 含量测定 取不同批号的样品，研细，约1g，精密称定，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别吸取供试品溶液各10μL，依法测定峰面积，计算含量。结果显示3批伤风停胶囊中欧前胡素的含量分别为0.1339mg·g-1、0.1607mg·g-1和0.3809mg·g-1。
3 讨论
3.1 测定波长的选择 采用二极管阵列检测器在波长190～400nm对欧前胡素照品溶液进行紫外扫描，其在248nm和300nm附近具有最大吸收峰，参考《中华人民共和国药典》2015年版一部“白芷”项下欧前胡素的检测波长[3]，故本实验选用300nm作为检测波长。
3.2 洗脱系统的选择 依据文献方法[6-7]，本实验比较了甲醇-0.1%磷酸溶液、甲醇-水溶液、乙腈-0.1%磷酸溶液作为流动相，实验结果表明，采用乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，欧前胡素的分离效果较好，干扰成分少，分离度达到要求。
3.3 供试品制备方法的选择 本实验比较了不同溶剂（乙醇、70%乙醇、甲醇、70%甲醇）进行超声和加热回流提取，结果显示，采用70%甲醇超声提取时，欧前胡素提取率高，且干扰少;同时考察了超声提取30、40、50、60min，试验结果表明超声提取40min时，欧前胡素基本提取完全，故选择超声提取40min。
3.4 含量测定结果的分析 3批伤风停胶囊样品含量测定结果表明，该制剂中欧前胡素的含量相差约3倍，其原因可能是不同批次原药材的差异所致，因此生产厂家应予以重视。
综上所述，所建立的高效液相方法简单易行，专属性好，为提高伤风停胶囊质量控制提供科学依据。
参考文献
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（收稿日期：2019-12-17 编辑：陶希睿）
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