胶质瘤EGFR、EGFRvⅢ蛋白的表达及临床意义

来源:用户上传      作者:朱文标　卢善明　李海南　肖焕钦　罗文娟　谢寿城　刘晋发

　　 【摘要】 目的：探讨EGFR、EGFRvⅢ蛋白在胶质瘤中的表达及其与临床病理的相关性，研究其与胶质瘤患者预后的相关性，分析胶质瘤患者的生存影响因素。方法：选取2013年8月-2018年10月在本院经手术治疗的胶质瘤病例104例，其中低级别胶质瘤（WHO Ⅱ级）27例，间变性胶质瘤（WHO Ⅲ级）20例，胶质母细胞瘤（WHO Ⅳ级）57例。存档蜡块免疫组化检测EGFR、EGFRvⅢ蛋白表达，收集临床病理参数、分子标记物，并进行随访。结果：EGFR蛋白表达阳性率为低级别胶质瘤（WHO Ⅱ级）44.4%（12/27），间变性胶质瘤（WHO Ⅲ级）50.0%（10/20），胶质母细胞瘤（WHO Ⅳ级） 68.4%（39/57），随着组织学级别的增加，EGFR阳性率增加，但差异无统计学意义（P>0.05）。EGFRvⅢ蛋白表达阳性率为低级别胶质瘤（WHO Ⅱ级）0，间变性胶质瘤（WHOⅢ级）为10.00%（2/20），胶质母细胞瘤（WHOⅣ级）为10.53%（6/57），差异无统计学意义（P>0.05）。13.1%（8/61）EGFR阳性胶质瘤表达EGFRvⅢ，EGFR阴性胶质瘤未发现有EGFRvⅢ的表达，两者呈正相关（r=0.242， P<0.05）。EGFR表达与分子标记物1p/19q杂合性缺失有关（P=0.029），与其他临床病理参数及其他分子标记物无关。EGFRvⅢ表达与临床病理参数及分子标记物无关。单因素分析显示EGFRvⅢ、年龄、组织学级别、KPS评分、治疗方案、IDH1基因突变、ATRX基因突变与胶质瘤患者生存有关（P<0.05），Cox分析显示年龄、组织学级别、治療方案及分子标记物IDH1是胶质瘤患者独立的预后预测因素（P<0.05），EGFRvⅢ不是胶质瘤患者独立的预后因素（P>0.05）。结论：胶质瘤EGFR、EGFRvⅢ蛋白的表达具有一定的临床意义，但不能作为胶质瘤的独立预后因素。
　　 【关键词】 胶质瘤 EGFR EGFRvⅢ
　　 Expression and Clinical Significance of EGFR and EGFRvⅢ Protein in Gliomas/ZHU Wenbiao， LU Shanming， LI Hainan， XIAO Huanqin， LUO Wenjuan， XIE Shoucheng， LIU Jinfa. //Medical Innovation of China， 2020， 17（10）： 0-015
　　 [Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of EGFR and EGFRvⅢ protein in gliomas. Method： A total of 104 cases of gliomas were treated in our hospital from August 2013 to October 2018， including 27 cases of low-grade gliomas （WHO grade Ⅱ）， 20 cases of anaplastic gliomas （WHO grade Ⅲ） and 57 cases of glioblastoma （WHO grade Ⅳ ）. EGFR and EGFRvⅢ protein expression were detected by immunohistochemistry. The clinical pathological parameters and molecular markers were collected and all the cases were followed up. Result： The positive rate of EGFR protein expression was 44.4% （12/27） in low-grade gliomas， 50.0% （10/20） in anaplastic gliomas and 68.4% （39/57） in glioblastomas. With the increase of WHO grade， the EGFR positive rate increased， but the difference was not significant （P>0.05）. The positive rate of EGFRvⅢ protein expression was 0 in low grade gliomas， 10.0% （2/20） in anaplastic gliomas and 10.53% （6/57） in glioblastomas. The difference was not significant （P>0.05）. 13.1% （8/61） EGFR-positive gliomas expressed EGFRvⅢ， and all EGFR-negative gliomas did not show EGFRvⅢ expression. The express of EGFR and EGFRvⅢ was positive correlation （r=0.242， P<0.05）. EGFR expression was associated with co-deletion of 1q/19p （P=0.029）， while was not associated with clinicopathological parameters and other molecular markers. EGFRvⅢ expression was not associated with clinicopathological parameters and molecular markers. Univariate analysis showed EGFRvⅢ， age， WHO grade， KPS score， treatment regimen， IDH1 mutation and ATRX gene mutation were associated with survival of glioma patients （P<0.05）， Cox analysis showed age， WHO grade， treatment regimen and IDH1 mutation were independent prognostic predictors of glioma patients （P<0.05）， and EGFRvⅢ was not independent prognostic factor for glioma patients （P>0.05）. Conclusion： The expression of EGFR and EGFRvⅢ protein has certain clinical significance， but it was not independent prognostic factor for gliomas. 　　 [Key words] Glioma EGFR EGFRvⅢ
　　 First-author’s address： Meizhou People’s Hospital， Meizhou 514031， China
　　 doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.10.003
　　 胶质瘤是最常见的原发性颅内肿瘤，研究发现，40%～50%的胶质瘤存在表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）异常表达，并且常伴随基因扩增及突变，最常见的突变形式是表皮生长因子受体突变体Ⅲ（epidermal growth factor receptor variant Ⅲ， EGFRvⅢ）[1]。EGFRvⅢ尚未在正常组织中检出，故被视为恶性肿瘤特异性表达的突变体。随着肿瘤分子生物学的发展，分子靶向药物治疗胶质瘤是将来达到临床治愈目标可行方案之一[1-2]。本文探讨EGFR、EGFRvⅢ在胶质瘤中的表达及其与临床病理的相关性，研究其与胶质瘤患者预后的相关性，分析胶质瘤患者的生存影响因素，现报道如下。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料 选取2013年8月-2018年10在本院经手术治疗的胶质瘤病例104例，其中男55例，女49例;年龄≥65岁者17例，<65岁者87例;肿瘤最大直徑<5.0 cm者46例，≥5.0 cm者58例;肿瘤位于额叶或颞叶者84例，位于其他位置者
　　20例。依据2016年世界卫生组织（WHO）的中枢神经系统胶质瘤分类标准进行组织学分级，低级别胶质瘤（WHO Ⅱ级）27例，间变性胶质瘤（WHO Ⅲ级）20例，胶质母细胞瘤（WHO Ⅳ级）57例。（1）纳入标准：①患者均有脑肿瘤手术切除史，术后病理证实为Ⅱ～Ⅳ级胶质瘤;②手术切除后均行总剂量为50～65 Gy的放射治疗;③隔3～6个月进行的MR随访复查中，出现异常强化病灶。排除标准：①患者<50岁或>80岁;②患者合并有肝、肾、肺等其他全身性疾病。该研究已经医院伦理学委员会批准，且患者知情同意。
　　1.2 EGFR、EGFRvⅢ蛋白表达检测 通过免疫组化方法检测EGFR、EGFRvⅢ蛋白检测，免疫组化采用S-P法，操作步骤严格按照试剂说明书。
　　1.3 EGFR、EGFRvⅢ免疫组化结果判读 EGFR、EGFRvⅢ免疫组化染色主要定位于细胞膜和/或细胞质。染色结果判定：以细胞膜和/或细胞质中出现突出于背景的呈棕黄色或棕黑色染色的细胞判读为阳性染色细胞。EGFR阳性判读标准为阳性染色细胞>50%肿瘤细胞;EGFRvⅢ阳性判读标准为阳性染色细胞>10%肿瘤细胞;即判读为胶质瘤EGFRvⅢ表达阳性。
　　1.4 统计学处理 应用SPSS 21.0软件进行统计学分析，计数资料采用率（%）表示，各组间比较采用，字2检验，生存分析采用Kaplan-Meier法，Cox比例风险模型应用于多因素生存分析，组间差异采用Log-rank检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 EGFR、EGFRvⅢ蛋白在胶质瘤中的表达 EGFR在胶质瘤的阳性表达率为58.7%（61/104），EGFR蛋白表达阳性率为低级别胶质瘤（WHO Ⅱ级）44.4%（12/27），间变性胶质瘤（WHO Ⅲ级）50.0%（10/20），胶质母细胞瘤（WHO Ⅳ级）68.4%（39/57），随着组织学级别的增加，EGFR阳性率增加，但差异无统计学意义（P=0.078）。EGFRvⅢ蛋白未发现其在低级别胶质瘤中有表达，EGFRvⅢ蛋白表达阳性率低级别胶质瘤（WHO Ⅱ级）为0，间变性胶质瘤（WHO Ⅲ级）为10.00%（2/20），胶质母细胞瘤（WHO Ⅳ级）为10.53%（6/57），差异无统计学意义（P>0.05）。EGFR阳性表达与分子标记物1p/19q杂合性缺失有关（P=0.029），与其他临床病理参数及其他分子标记物无关。本实验未发现EGFRvⅢ表达与临床病理参数及分子标记物有关。见表1。
　　2.2 EGFR蛋白表达与EGFRvⅢ蛋白表达的关系 13.1%（8/61）EGFR蛋白阳性表达胶质瘤病例表达EGFRvⅢ蛋白，EGFR蛋白阴性胶质瘤病例未发现有EGFRvⅢ蛋白的阳性表达，两者呈正相关（r=0.242，P<0.05）。见表2。
　　2.3 EGFR、EGFRvⅢ蛋白表达与胶质瘤的预后分析 用电话及智慧电子病历系统进行随访，失访7率，随访率93.3%;至随访截止日期（随访截止日期为2019年10月1日），本组病例死亡60例，占57.7%（60/104）。本组病例总生存期均值为（35.96±3.07）个月;中位生存期为（27.50±5.72）个月。Kaplan-Meier生存分析显示EGFR蛋白表达与胶质瘤患者生存无关（P>0.05），EGFRvⅢ蛋白表达与胶质瘤患者生存有关（P<0.05）。年龄、组织学级别、KPS评分、治疗方案、IDH1基因突变、ATRX基因突变与胶质瘤患者生存有关（P<0.05），其他与胶质瘤生存无关（P>0.05）。见表3。Cox多因素分析显示年龄、组织学级别、治疗方案及IDH1突变是胶质瘤患者独立的预后因素（P<0.05），EGFRvⅢ不是胶质瘤患者独立的预后因素（P>0.05）。见表4。
　　3 讨论
　　 EGFR是一种相对分子质量为170KD的跨膜蛋白受体，由三个功能区组成：胞外配体连接区、单链跨膜区和胞内酪氨酸激酶区。其配体有表皮生长因子、转化生长因子、双向调节因子及神经调节蛋白等，一旦胞外区与配体连接，就会发生同源或异源二聚化，导致胞内区中酪氨酸残基自体磷酸化，激活下游的信号通路，调控细胞的增殖、分化和凋亡，并参与肿瘤细胞的迁移、侵袭、转移和血管发生等。EGFRvⅢ是EGFR的胞外区框内缺失性突变，其胞外部分的2-7号外显子缺失，导致801个碱基对缺失，使外显子1和外显子8相连接并融合产生一个新的氨基酸--甘氨酸，即为EGFRvⅢ突变。EGFRvⅢ突变体丧失了连接配体的功能，但可以在不依赖配体的情况下组成型激活酪氨酸激酶，产生自体磷酸化、诱发下游信号传导通路、引起级联反应，参与肿瘤的进程[1，3]。 　　 本文的数据显示EGFR蛋白过表达与胶质瘤患者的预后无关，而EGFRvⅢ表达与胶质瘤患者的不良预后相关，提示EGFR/EGFRvⅢ基因扩增/突变可能仅仅是评估预后的一项因素，本文数据不支持EGFRvⅢ为独立的显著的不良预后的预测因素。
　　 EGFR/EGFRvⅢ基因扩增/突变参与胶质瘤的发生发展已取得了广泛共识[1-3]。但其在胶质瘤患者中的预后意义一直存在争议，许多研究报告了关于EGFR/EGFRvⅢ作为预后标志的相互矛盾的证据[4-9]，例如Shinojima等[4]研究表明EGFR扩增是一个独立的、显著的、负性生存预测因子，尤其对于<60岁的胶质母细胞瘤患者;EGFR扩增的胶质母细胞瘤中，EGFRvIII的过度表达是不良生存预后的独立的显著的预测指标。Lv等[5]认为EGFR扩增与无进展生存期相关，而不能预测总生存期。Hobbs等[6]的资料则认为EGFR的预后价值与基因扩增强度相关，EGFR基因高度扩增组总生存期明显优于低度扩增组及无扩增组。Bieńkowski等[7]研究认为EGFR的预后价值需与其他分子标记物联合评估，例如EGFR扩增合并CDKN2A缺失预后较好;而EGFR扩增合并7号染色体多体则预后差;Heimberger等[8]认为EGFR/EGFRvⅢ基因扩增/突变均不能独立预测胶质母细胞瘤患者的总生存期;但对于生存期大于等于1年的患者，EGFRvⅢ蛋白表达是一个显著的独立的负性预后指标。van den Bent等[9]的随机临床试验发现EGFRvⅢ蛋白表达与较长的无进展生存时间相关;部分研究则提示EGFRvⅢ蛋白扩增与预后无关[4，8]。研究结果的不一致可能与不同的EGFR/EGFRvⅢ检测技术及评估标准、不完全的临床资料、研究人員的主观性、肿瘤异质性等有关。本研究中的样本数量较少，研究对象为可手术治疗的胶质瘤患者，而忽略了那些不能接受手术治疗的患者，可能会对实验结果产生影响。目前报道的多为单中心小样本的研究，因此，需阐明EGFR/EGFRvⅢ基因扩增/突变对预后的预测价值，多中心大样本的研究必不可少。
　　 EGFR/EGFRvⅢ蛋白表达和基因异常是胶质瘤靶向治疗中的重要靶点，尤其是EGFRvⅢ只在恶性肿瘤中表达，利用EGFRvⅢ单抗可特异识别胶质瘤细胞，同时可以发挥靶向治疗的作用。然而在胶质瘤患者的临床试验中，EGFR/EGFRvⅢ靶向治疗的效果尚不满意[1-3，5，9-10]，寄予重望的EGFRvⅢ重排疫苗制剂Rindopepimut在Ⅲ期临床试验中不得不在试验中期分析后终止[11]。EGFR/EGFRvⅢ靶向治疗的临床应用尚需更深入的基础与临床研究。
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　　（收稿日期：2019-11-27） （本文编辑：周亚杰）
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