中药复方舒肤膏质量标准研究

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　　摘要：采用薄层色谱法对荆芥、防风、凌霄花和狼毒进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对中药复方舒肤膏的有效成分梣酮和黄柏酮进行含量测定。结果表明，薄层色谱法结果理想，阴性样品无干扰;在5.92～47.36 μg/mL梣酮与峰面积线性关系良好（r=0.999 1），平均回收率为99.76%（RSD=1.34%），在10.2～81.6 μg/mL黄柏酮与峰面积线性关系良好（r=0.999 0），平均回收率为99.89%（RSD=1.63%），表明该方法操作简便，专属性好，准确可靠，可用于中药复方舒肤膏的质量控制。
　　关键词：中药;复方舒肤膏;质量标准;薄层色谱法;高效液相色谱法
　　中图分类号：R284.1;O657.7+2         文献标识码：A
　　文章编号：0439-8114（2020）03-0130-04
　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.03.028
　　Study on quality standard of Chinese medicine compound shufu cream
　　ZHAO Yu，SHI Lei，ZHANG Qian-yu，YANG Jia，YANG Hong-bing
　　（Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China）
　　Abstract： TLC was used to qualitatively identify Nepeta cataria L， Saposhnikovia divaricata （Trucz.） Schischk， Campsis grandiflora and Euphorbia fischeriana Steud. The content of the active constituents of fraxinellone and obacunone from cortex dictamni  was determined by HPLC. The results of TLC were ideal， and the negative samples had no interference. The linear relationship between the anthrone and the peak area was good （r=0.999 1） and the average recovery was 99.76% （RSD=1.34%） in the concentration range of 5.92～47.36 μg/mL. In the concentration range of 10.2～81.6 μg/mL， the linear relationship between the ketone and the peak area was good （r=0.999 0）， and the average recovery was 99.89% （RSD=1.63%）. This method is easy to operate， has good specificity， accurate and reliable， and can be used for quality control of traditional Chinese medicine compound skin cream.
　　Key words： traditional Chinese medicine compound skin cream; quality standard; TCL; HPLC
　　湿疹是由多种内外因素引起的一种具有明显渗出倾向的急性或慢性皮肤炎性反应。传统中医认为，湿疹发病缘于禀赋不耐，腠理不密，外界风热湿邪侵袭，即先天不足，外加内湿外风热交困而致[1]。因此，中药治疗针对风、湿、热症入手，運用内服和外用的方式治疗湿疹，其中外用中药复方软膏以其毒副作用轻微和疗效显著等优点，广为运用[2]。舒肤膏是在湖北省中医院院内制剂的基础方上进行加减，主要由苦参、白鲜皮、狼毒、荆芥、防风、凌霄花等中药组成的复方制剂，用于治疗湿疹，缓解皮肤干燥、瘙痒及脱屑等症状，其中白鲜皮所含梣酮、黄柏酮是其有效成分[3-7]。研究建立了以HPLC法测定中药复方舒肤膏中梣酮、黄柏酮的含量，并采用TCL法对荆芥、防风、凌霄花及狼毒等成分进行定性鉴别，方法简便可靠，可用于该制剂的质量控制。
　　1  材料与方法
　　1.1  仪器
　　LC-20AD液相色谱仪（日本岛津）;SPD-20A UV检测器;Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;DTP-1无油真空泵;AL104型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）;十万分之一分析天平（METTLERTOLEDO梅特勒托利多）;SK250H型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）;DK-98-1型电热恒温水浴锅。
　　1.2  试药
　　梣酮对照药品（111700-201603）、黄柏酮对照药品（111923-201604）、升麻素苷对照品（111522-201712）、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品（111523-201811）、荆芥对照药材（120911-201512）、防风对照药材（120947-201810）、凌霄花对照药材（121122-201203）、狼毒对照药材（121331-201303）均购自中国食品药品检定研究院;岩大戟内酯B对照药品（批号：PS180911-01）购自成都普思生物科技股份有限公司;中药复方舒肤膏（批号分别为190412、190425、190506、190523、190610）阴性对照软膏（湖北中医药大学药学院）;乙腈、甲醇（色谱纯），水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。薄层用硅胶G，薄层用硅胶GF254（青岛海洋化工有限公司）。 　　1.3  方法
　　1.3.1  溶液的配制
　　1）对照品溶液的制备。精密称取1.48 mg梣酮和2.55 mg黄柏酮于25 mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成含梣酮59.2 μg/mL和黄柏酮0.102 mg/mL的混合对照药品溶液。
　　2）供试品溶液的制备。取中药复方舒肤膏2 g，加入5 g硅藻土，搅拌均匀后，转移至100 mL锥形瓶，加20 mL乙醇超声15 min后，乙醇补齐失重，滤过，滤液蒸干，残渣加入2 mL甲醇溶解即得供试品溶液。
　　3）阴性对照溶液。按处方取除白鲜皮的各味药材，按处方量配制白鲜皮阴性软膏，按“对照品溶液的制备”方法制得白鲜皮阴性对照溶液。
　　1.3.2  色谱条件  色谱柱为Diamonsil C18柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）;流动相为甲醇-水（55∶45），流速1.0 mL/min;检测波长236 nm;柱温40 ℃;进样量为10 μL;理论板数按梣酮峰计，不低于3 000，各相邻色谱峰之间的分离度大于1.5。
　　1.3.3  线性关系考察  从含59.2 μg/mL梣酮、0.102 mg/mL黄柏酮的混合对照品溶液中分别精密移取1、2、4、6、8 mL至10 mL容量瓶中，甲醇定容，稀释为含梣酮浓度分别为5.92、11.84、23.68、35.52、47.36 μg/mL，含黄柏酮分别为10.2、20.4、40.8、61.2、81.6 μg/mL 5种不同质量浓度的混合对照品溶液。各取10 μL进样分析。以梣酮、黄柏酮峰面积为纵坐标（Y），对照品溶液浓度为横坐标（X），进行线性回归。
　　2  结果与分析
　　2.1  专属性试验
　　在“1.3.2”的色谱条件下，对照品、供试品及阴性样品的液相色谱（图1）显示，样品中其他成分对梣酮与黄柏酮的测定无干扰。
　　2.2  方法学考察
　　2.2.1  线性关系考察结果  以梣酮、黄柏酮峰面积分别为纵坐标（Y），对照品溶液浓度为横坐标（X），进行线性回归，得梣酮回归方程Y=5 367.1X+1 950.7（R=0.999 1，n=10），线性范围5.92～47.36 μg/mL;黄柏酮回归方程Y=14 859X-670.59（R=0.999 0，n=10），线性范围10.2～81.6 μg/mL。
　　2.2.2  精密度试验  精密吸取同一份混合对照品溶液10 μL，连续进样6次，结果测得梣酮和黄柏酮的峰面积标准偏差RSD分别为1.61%、1.91%，表明该方法精密度良好。
　　2.2.3  重复性试验  取同一批号的样品6份，按照“1.3.1”下供试品的制备方法制成供试品溶液，进样分析。测得梣酮和黄柏酮的含量RSD值分别为2.64%和2.37%，表明该方法重复性良好。
　　2.2.4  稳定性试验  取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24 h进样，测定目标物质的峰面积。结果测得梣酮、黄柏酮的峰面积RSD分别为1.34%、1.72%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
　　2.2.5  加样回收试验  精密称取6份已知梣酮、黄柏酮含量的同批样品1 g，分别精密加入2 mL浓度为0.067 6 mg/mL的黄柏酮对照品溶液，1 mL浓度61.2 μg/mL的梣酮对照品溶液，按照“1.3.1”项下供试品的制备方法制成供试品溶液，按照“1.3.2”项下的色谱条件，检测目标物质的峰面积，测得梣酮、黄柏酮的平均回收率分别为99.89%与99.76%，RSD分别为1.63%、1.34%（表1）。
　　2.3  样品测定
　　取不同批次样品5份，分别按“1.3.1”方法制備供试品溶液，按“1.3.2”色谱条件进样10 μL，以外标法计算得到梣酮与黄柏酮的平均含量分别为0.056 96、0.137 88 mg/mL。
　　2.4  定性鉴别
　　2.4.1  荆芥  取4 g中药复方舒肤膏于研钵，加入10 g硅藻土，研磨均匀后转移至100 mL锥形瓶，加入60 mL石油醚，超声15 min，补齐失重，摇匀，静置过夜，滤过，取滤液蒸干至1 mL作为供试品溶液。取不含荆芥药材的阴性中药复方乳膏，同法制得荆芥阴性样品溶液。取荆芥对照药材粗粉0.8 g，加入石油醚（60～90 ℃）20 mL，密塞，振摇，放置过夜，滤过，滤液挥至1 mL，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各7 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（17∶3）为展开剂展开，取出晾干，喷含5%香草醛的5%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品则无（图2）。
　　2.4.2  防风  取5 g中药复方舒肤膏于100 mL锥形瓶，加入20 mL丙酮，超声处理20 min，补齐失重，滤过，滤液蒸干，残渣用1 mL乙醇溶解，为供试品溶液。取不含防风药材的阴性中药复方乳膏，同法制得防风阴性样品溶液。取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品， 加入1 mL乙醇制成各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。取防风粉末1 g，加丙酮20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加1 mL乙醇溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验（图3），吸取上述4种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（4∶1）为展开剂展开，取出晾干，置紫外灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品则无。 　　2.4.3  凌霄花  取3 g中药复方舒肤膏于100 mL锥形瓶，加入甲醇10 mL，超声处理30 min，冰水浴 1 h，濾过，滤液蒸干，残渣加1 mL甲醇溶解，为供试品溶液。取不含凌霄花药材的阴性中药复方乳膏，同法制得凌霄花阴性样品溶液。取凌霄花粉末0.5 g，加石油醚（60～90 ℃）15 mL，超声处理15 min，滤过，弃去石油醚液，药渣加甲醇15 mL，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加1 mL甲醇作为对照药材溶液。称取毛蕊花糖苷对照药品适量，置于10 mL量瓶中，加入甲醇溶解、定容，配制成0.8 mg/mL的溶液，为对照药品溶液。照薄层色谱法试验（图4），吸取上述4种溶液各7 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲甲酸（17∶1）为展开剂展开，取出晾干，喷磷钼酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品则无。
　　2.4.4  狼毒  取4 g中药复方舒肤膏于100 mL锥形瓶，加入30 mL乙醇，充分振摇，水浴加热冷凝回流30 min后，冰水浴1 h，滤过，滤液蒸干，加入2 mL甲醇溶剂，为供试品溶液。取不含狼毒药材的阴性中药复方乳膏，同法制得狼毒阴性样品溶液。取适量对照药品岩大戟内酯B于10 mL量瓶，甲醇定容，为对照品溶液。取狼毒对照药材粗粉2 g，加乙醇 30 mL，加热回流1 h，放冷，过夜，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验（图5），吸取上述4种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（8.5∶1.5）为展开剂展开，取出晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰， 置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
　　3  讨论
　　白鲜皮作为一种皮肤病常用中药，具有清热燥湿、祛风解毒、杀虫止痒的功效，常用于治疗湿热疮毒、黄水淋漓、湿疹、疥癣、风湿热痹、黄疸、尿赤等症，尤其善于治疗湿疹的风热症和湿热症。现代研究表明，白鲜皮的提取物具有抗菌、消炎的作用[8]，因此测定白鲜皮的有效成分梣酮和黄柏酮含量，有助于规范舒肤膏的药效质量评价。采用高效液相色谱法测定含量时，分别选用甲醇-水（60∶40）和甲醇-水（55∶45）作流动相[9]，试验结果显示，后者能更好的将梣酮与黄柏酮分开，保证其分离度R>1.5，因此采用甲醇-水（55∶45）作流动相，使2个目标峰与杂质峰能较好的分离，且峰形良好，分离度、理论板数、拖尾因子等均符合要求，2个目标峰的保留时间相对适宜。舒肤膏为乳膏基质的外用乳膏剂，在做含量测定和定性鉴别时，将有效成分高效地从基质中分离尤为重要，因此采用硅藻土对检品做分散处理[10]，水浴加热或超声处理对检品做破乳处理的方法，最大程度地提取有效成分。
　　通过对5个批次中药复方舒肤膏的含量测定和定性鉴别等研究，证实该试验结果稳定可靠，可以有效地控制该制剂的药品质量。
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　　收稿日期：2019-10-21
　　作者简介：赵  雨（1993-），女，湖北十堰人，在读硕士研究生，研究方向为中药品种、资源及开发，（电话）15392844720（电子信箱）  472932806@qq.com;通信作者，杨红兵（1963-），男，教授，主要从事中药品种、资源及开发研究，（电话）15335896488（电子信箱）  yanghb321@126.com。
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