黄精药材和黄精片在炮制工艺中的质量研究
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作者:胡中盛 郑颖 何娥英
摘要 [目的]以黃精多糖含量为参考指数，研究黄精药材和黄精饮片经炮制后对黄精中黄精多糖含量的影响，为黄精在实际生产中优选出更加合理的炮制工艺。[方法]预试验采用黄精药材和黄精片的不同炮制方法进行试验，得到多组样品，每个样品粉粹成细粉，用紫外分光光度法测定黄精多糖的含量，对比得出最适合工厂生产的工艺。再选取润制时间、焖制时间和蒸制时间为考察因素，每个因素设3个水平，以黄精多糖含量为指标，采用3因素3水平正交试验对黄精炮制工艺进行优选。最后，用优选的炮制工艺进行可验证性试验。[结果]酒黄精饮片的炮制过程中，润制时间为主要因素。对于浸出物的分析，影响浸出物含量的因素从大到小依次为蒸制时间、润制时间、焖制时间，即蒸制时间过长，浸出物含量明显会下降，说明酒黄精饮片在炮制过程中蒸制时间不宜过长。对于黄精多糖的分析，影响黄精多糖含量的因素从大到小依次为润制时间、焖制时间、蒸制时间，即润制时间和焖制时间越长，黄精多糖的含量会越来越高。[结论]该试验以黄精多糖含量为指标，通过比较，得到黄精饮片加15%的黄酒润制10 h，蒸制10 h，焖制10 h，取出，干燥，为黄精生产最佳工艺条件且可行性良好。
关键词 黄精药材;黄精片;炮制工艺;多糖含量;含量测定
Abstract [Objective]Using polysaccharide content of Polygonatum sibiricum Red as a reference index， the effect of fresh Polygonatum sibiricum Red and Polygonatum sibiricum Red tablets by processing on the content of polysaccharide in Polygonatum from Rhizoma Polygonati was studied， so that a more reasonable processing technology was selected for Polygonatum sibiricum Red.[Methods]The preliminary test uses different processing methods of fresh Polygonatum sibiricum Red and Polygonatum sibiricum Red tablets to obtain multiple groups of samples. Each sample was finely divided into powders. The content of Polygonatum sibiricum polysaccharides was determined by ultraviolet spectrophotometry， and the process most suitable for factory production was compared.Then select the steaming time， run time and stewing time as factors and each factor set three levels，the content of Polygonatum sibiricum polysaccharides was used as an index. The 3 factors and 3 levels orthogonal test was used to optimize the processing of Polygonatum sibiricum.Finally， the optimal processing technology was used to verify the feasibility of the method. [Result]The main factors were the run time in the processing of the decoction pieces of wine. For the analysis of the extract， the factors that affect the content of the extract was steaming time， run time and stewing time， the steaming time was too long， the content of the extract was obviously decreased， which indicated that the steaming time should not be too long. For the analysis of Polygonatum sibiricum polysaccharides，effects of Polygonatum sibiricum polysaccharides content was run time，stewing time and steaming time， run time and stewing time longer， Polygonatum sibiricum polysaccharides content was high. [Conclusion]Polygonatum sibiricum polysaccharides content as the index， by comparison， polygonatum tablets plus 15% of rice wine run of 10 h， steamed 10 hours， 10 hours of stewing， taking out and drying， for Polygonatum optimum technological conditions of production and good feasibility. Key words Fresh Polygonatum sibiricum Red;Polygonatum sibiricum Red tablet;Processing technology;Polysaccharide content;Content determination
黄精，百合科植物，按其外观形状的不同，通常被称为“姜形黄精”“鸡头黄精”和“大黄精”。黄精归脾、肾、肺经，为滋阴之佳品、补肾之良药[1]。生品黄精具有一定的麻舌感、容易刺激咽喉，如果不慎将生黄精或其汁液接触到人体皮肤，将会有强烈的瘙痒感，如果长时间闻黄精的气味，会出现刺眼的感觉。黄精生品经过炮制后，可以减轻它的刺激性和副作用，使之糖性增强，口感良好，利于服用。炮制后的黄精，其药物的耐药性产生一定的变化，炮制过后有利于黄精有效成分的累积，黄精中的黏液质遭到破损并被清除，使黄精在使用时滋而不腻，在增强黄精药效的同时，还可以增加其口感。多年的临床实践证明，酒制能提升药物疗效，使之同时更好地发挥补益的功效。黄精多糖具有延缓衰老、调节免疫、降低血脂、降低血糖等药理作用[2-4]。
自古以来，黄精的炮制工艺累计达20多种[5-7]。黄精的最早加工方法见于我国南北朝时期的《雷公炮炙论》[8]，据雷公炮炙论记载：“以溪水洗净......，曝干用”。据唐代《千斤翼方》记载：“拣肥大者，熟蒸，微曝干以蒸，待再曝干，......”，此方法即称为“重蒸法”。根据现代黄精炮制研究，取黄精适量，放入锅内，蒸制，以清水没过黄精，蒸至水沸腾，适时加水，煮至透心;取出，干燥，至6成干，放入蒸笼内，蒸约4 h，取出，干燥。如此反复蒸晒多次，将蒸煮液洒在黄精上，拌匀，再蒸，干燥，放置于荫凉处摊晾。截止至今，仍然没有针对黄精炮制工艺的详尽报道。目前炮制工艺分为两类，一部分是根据传统加工方法，另一部分是根据当地用药习惯，总而言之全国各地方加工方法没有统一的要求[9]，大部分都是基于经验，没有详细的科学数据，药商和一些加工商基本上都是凭经验掌握，即以大拇指指甲掐入为度，说明蒸或煮到了黄精的适宜程度;或掰开断面，可以看到近透心时便说明加工到了适宜程度。现如今对黄精炮制前后几种混合成分的研究，侧重于炮制前后因素指标的对比[10]，由于黄精的炮制工艺研究可信度差、说服力不强、没有规范性，所以创建科学规范可控制的炮制方法、增加黄精药材的外观美感与口感势在必行。通过严格控制润制时间、蒸制时间和焖制时间，对黄精加工过程当中醇浸出物、外观颜色、黄精多糖的含量、味道的变化进行对比分析，确定黄精最适合的加工方法，不仅体现中药多成分、多层次的特点，而且对综合评判黄精炮制工艺方法、控制产品质量有研究性意义[11]。
1 材料与方法
1.1 仪器 UV-2450型紫外分光光度计（上海科导超声仪器有限公司）;SK8200B型超声清洗仪（上海科导超声仪器有限公司）;万能高速粉碎机（上海道红商贸有限公司）;DZKW-4电子恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司）;GMSX-280手提式压力蒸汽灭菌器（北京市光明医疗仪器有限公司）;GB-T25497分析天平（奥豪素仪器有限公司）;数控中药蒸煮锅（康华制药机械有限公司）。
1.2 试材 该试验所用黄精药材产自贵州，经亳州市沪谯药业有限公司质量负责人高学侠鉴定为百合科植物滇黄精的干燥根茎。D-无水葡萄糖（中国食品药品检定研究院）;黄酒（亳州市恒硕发酵制品有限责任公司）;乙醇（天津四友，一级分析纯）;蒽酮（天津市科密欧化学试剂有限公司）;硫酸（国药化学集团）;水为纯化水;其他试剂均为分析纯。
1.3 方法
1.3.1 黄精的炮制方法。
1.3.1.1 酒黄精的炮制方法。称取黄精原药材2 kg挑选出杂质，并清洗干净，加入黄酒400 g，润透，置蒸煮容器内，蒸至内外表面滋润显黑色，焖制过夜，取出，晒或烘至外部干燥内部湿润，切制成厚片，然后将蒸制时所得到的汤汁拌入，让其汁液吸收均匀，取出，干燥，筛去灰屑[12]。
1.3.1.2 酒黄精饮片的炮制方法。取黄精饮片2 kg挑选出杂质，并清洗干净，加入黄酒300 g，润透，置蒸煮容器内，蒸至内外表面滋润显黑色，焖制过夜，取出，然后将蒸制时所得到的汤汁拌入，晒或晾至外部干燥内部湿润，干燥，筛去灰屑。
1.3.2 浸出物测定。参照《中国药典》2015年版四部的通则项下热浸法测定浸出物[1]，包括水溶性浸出物和醇溶性浸出物。
1.3.2.1 水溶性浸出物。取黄精样品大约4 g，精密称取，放置于250 mL的具塞锥形瓶中，精密量取水100 mL，密闭，称定其重量，安静环境下放置1 h后，连接回流冷凝装置，加热至液体沸腾，并保持微沸腾1 h。放冷后，取下锥形瓶，密闭，再称定重量，用蒸馏水补足失去的重量，振荡，摇匀，用干燥过滤器滤过，精密量取过滤液25 mL，置干燥且恒重的蒸發皿中，放置于水浴锅上蒸干后，于105 ℃条件下干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，快速精密称定其重量[1]。
1.3.2.2 醇溶性浸出物。按照“1.3.2.1”项下的水溶性浸出物测定法测定。用稀乙醇代替水作溶剂。
1.3.3 溶液的制备。
1.3.3.1 对照品溶液的制备。取经过105 ℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品33 mg，精密称定，置100 mL量筒中，加水，溶解，稀释至刻度，振荡，摇匀，即得每1 mL中含无水葡萄糖0.33 mg[1]。
1.3.3.2 酒黄精样品溶液的制备。取酒黄精样品细粉0.25 g，精密称定，置250 mL圆底烧瓶中，加80%乙醇溶液150 mL，置水浴中加热回流1 h，趁热过滤，过滤剩余的残渣用80%热乙醇洗涤3次，每次10 mL，将残渣及滤纸置烧瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加热回流1 h，趁热过滤，第二次过滤的残渣及烧瓶用热水洗涤4次，每次10 mL，合并滤液与洗液，冷却，转移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，振荡，摇匀，即得[1]。 1.3.3.3 酒黄精饮片样品溶液的制备。精密称取酒黄精饮片样品细粉0.25 g，其余操作同“1.3.3.2”项下，制备得到酒黄精饮片样品溶液。
1.3.3.4 0.2%蒽酮-硫酸试液的配制。称取约0.20 g蒽酮，加入100 mL硫酸溶液，放置于棕色瓶中，摇匀后放于冰箱中（现配现用）。
1.3.4 方法学考察。
1.3.4.1 标准曲线的绘制。精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分别放置于10 mL具塞刻度试管中，分别加水至2.0 mL，振荡，摇匀，在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后置水浴锅中保温10 min，取出，立即放置于冰水浴中再冷却10 min，取出，以蒸馏水作为空白试验，在582 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标、对照品浓度为横坐标绘制标准曲线，确定线性范围[1]。
1.3.4.2 精密度试验。精密吸取对照品溶液1.0 mL，置于具塞试管中，其余操作同“1.3.4.1”，于582 nm处测定吸光度，连续测定6次，计算RSD值，要求该值小于3%。
1.3.4.3 重复性试验。平行称取酒黄精样品和酒黄精饮片样品各6份，按“1.3.3.2”和“1.3.3.3”方法制备样品溶液，测定其吸光度，计算RSD值，要求该值小于3%。
1.3.4.4 稳定性试验。取酒黄精样品和酒黄精饮片样品，按照“1.3.3.2”和“1.3.3.3”方法制备样品溶液，分别于10 min、30 min、1 h、2 h、3 h测定吸光度，计算RSD值，要求该值小于3%。
1.3.4.5 加样回收率试验。取已知黄精多糖含量为18.1%的黄精饮片药材粉末约0.3 g，平行5份，加入无水葡萄糖1 mL，合0.33 mg，精密称定，按照“1.3.3.2”和“1.3.3.3”方法制备供试品溶液，按紫外分光光度计法测定供试品溶液黄精多糖含量，计算加样回收率和RSD。
1.3.5 单因素试验。
1.3.5.1 酒润方法。考察酒润法中不同加酒量和润制时间对药材性状的影响，分别称取黄精原药材和黄精饮片约100 g，加酒量为5%、10%、15%、20%，分别润制8、10、12、16 h，观察药材性状。
1.3.5.2 蒸法。考察蒸法中蒸制时间对药材性状的影响，分别称取黄精原药材和黄精饮片约100 g，将水烧开后再放药材，分别蒸6、8、10、12 h，观察药材性状。
1.3.5.3 蒸制次数。考察蒸法中蒸制次数对药材性状的影响，分别称取酒黄精原药材和酒黄精饮片药材约100 g，分别蒸制2、3、4、5次，观察药材性状。
1.3.6 正交试验。根据初步的测试结果，以及《中国药典》和各省市炮制规范，确定以焖制时间、蒸制时间、润制时间为考察因素（黄精药材黄酒用量为20%，黄精饮片黄酒用量为15%），每个因素3个水平，因素水平见表1～2。
2 结果与分析
2.1 方法学考察
2.1.1 标准曲线的绘制。按照“1.3.4.1”方法操作，以吸光度为纵坐标、对照品浓度为横坐标绘制标准曲线，得葡萄糖的回归方程为Y=0.059 21x+0.050 33（r=0.996），表明葡萄糖含量在19.44～32.40 μg有良好的线性关系。
2.1.2 精密度试验。按照“1.3.4.2”方法操作，计算得出RSD为1.61%，表明仪器精密度良好，符合含量测定要求。
2.1.3 重复性试验。按照“1.3.4.3”方法操作，测得酒黄精样品的RSD为1.27%，酒黄精饮片样品的RSD为0.77%，表明该方法重复性良好。
2.1.4 稳定性试验。按照“1.3.4.4”方法操作，测得酒黄精样品的RSD为1.59%，酒黄精饮片样品的RSD为1.54%，表明该样品溶液在3 h内基本稳定。
2.1.5 加样回收率试验。由表3可知，葡萄糖的平均加样回收率为98.4%，RSD为0.77%，表明该方法回收率较好，方法可行。
2.2 单因素试验
2.2.1 酒润方法。由表4可知，加酒量为5%时药材中间一直有干心;加酒量为10%、润制16 h时药透无干心;加酒量为20%时，药材润制12 h药透。因此，黄精原药材的酒润法初步选用加酒量20%、润制时间12 h的工艺。
由表5可知，加酒量为5%时黄精饮片中间一直有干心;加酒量为10%、润制16 h时药透无干心;加酒量为15%时，药材润制10 h药透;加酒量为20%时，药材润制12 h药透。因此，黄精饮片的酒润法初步选用加酒量15%、润制时间10 h的工艺。
2.2.2 蒸法。对黄精原药材和饮片分别蒸6、8、10、12 h，观察原药材性状分别出现6 h稍硬、8 h略硬、10 h部分略硬、12 h 软硬适当，因此选择黄精原药材蒸制时间为12 h。观察饮片性状分别出现6 h稍硬、8 h软硬适当、10 h过软、12 h过软，因此选择黄精饮片蒸制时间为8 h。
2.2.3 蒸制次數。分别称取酒黄精原药材和酒黄精饮片药材约100 g，分别蒸制2、3、4、5次，观察原药材性状分别出现蒸2次蒸制不完全、3次有残留黄酒、4次蒸制完全、5次蒸制完全，饮片2次蒸制不完全、3次蒸制完全、4次蒸制完全、5次过黏，因此选择酒黄精原药材在反复蒸制4次可蒸制完全，酒黄精饮片在反复蒸制3次即可蒸制完全。
对比3组单因素试验，考虑到大生产中的生产成本和生产效率等诸多因素，在实际生产中可考虑选用黄精饮片进行生产，可节省成本和时间。
2.3 正交试验
2.3.1 酒黄精的正交试验。从表6可以看出，在酒黄精的炮制过程中，焖制时间可视为主要因素。对于浸出物的研究可知，浸出物的含量随着焖制的时间延长而增高，但是如果蒸制时间过短，则会影响浸出物含量。对于黄精多糖的研究可知，黄精多糖含量的影响因素从大到小依次为C、A、B，即焖制时间越长，黄精多糖的含量越高。因此由以上各个数据分析可得，酒黄精的最佳炮制工艺为A2B3C3，即黄精药材除去杂质后洗净，加20%的黄酒拌匀润制12 h，蒸制12 h，再焖制14 h，取出，干燥，切制成厚片。 2.3.2 酒黄精饮片的正交试验。从表7可以看出，在酒黄精饮片的炮制过程中，润制时间可视为主要因素。对于浸出物的分析，影响浸出物含量的因素从大到小依次为B、A、C，即焖制时间过长，浸出物含量会明显下降，说明酒黄精饮片在炮制过程中蒸制时间不宜过长。对于黄精多糖的分析，影响黄精多糖含量的因素从大到小依次为A、C、B，即润制时间和焖制时间越长，黄精多糖含量会越来越高。因此由各个数据分析得出，酒黄精饮片的最佳炮制工艺为A2B3C3，即黄精饮片洗净除去杂质，加15%的黄酒酒润10 h，蒸制10 h，焖制10 h，取出，干燥。
2.3.3 验证试验。由“2.3.1”和“2.3.2”结果可知，在实际生产中可考虑用黄精饮片进行炮制，取黄精饮片洗净，加15%黄酒润制10 h，放在蒸具内，蒸制10 h，取出，干燥。
分别称取酒黄精饮片5组，每组约200 g，按最佳工艺条件制备样品，筛去碎屑，粉碎成细粉，按照“1.3.3.2”和“1.3.3.3”方法制备供试品溶液。按照“1.3.4.1”项下对照品含量测定方法分别测定供试品溶液中黄精多糖的含量，以无水葡萄糖计，结果见表8。由表8可知，多糖含量的RSD为1.69%，表明该生产工艺在生产中切实可行。
3 结论与讨论
在酒润法单因素考察时润制时间和加黄酒用量对药材的性状影响较大。酒润时间过长会引起黄精饮片发黑，影响感官，可能也会影响有效成分的含量，润制时间过短会有干心。在酒润法单因素考察时，用酒量过少会拌不均匀，过多成本又太高。
正交试验对蒸制时间、焖制时间和润制时间进行了考察，得出蒸制时间和焖制时间为影响黄精多糖含量的显著性因素，蒸制时间和焖制时间越长，黄精多糖的含量越高。在对比黄精药材和黄精饮片的生产炮制过程中，得出用黄精饮片直接炮制可以大大缩短时间，并更有利于黄精多糖的吸收。
该试验以黄精多糖为指标，得出酒黄精饮片的多糖含量要比酒黄精的多糖含量高，同比之下，在实际生产过程中，考虑到生产成本和生产效率等多个因素，选用黄精饮片进行实际生产，既可以减少人力和物力，同时可节约成本并可提高效率。但是在该试验中未涉及到干燥温度和干燥时间的考察，所以未知干燥温度和干燥时间对黄精多糖含量是否有影响有待进一步考察研究。
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