蓝靛果忍冬E8离体快繁无菌体系建立分析
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摘要：本文以吉林农业大学小浆果基地引进的蓝靛果忍冬优良品种E8为研究对象，从外植体的消毒、基本培养基、不同激素等方面进行了离体组织培养研究，旨在探求最适合蓝靛果忍冬组培苗离体快繁的条件，从而筛选出最利于蓝靛果忍冬组培苗扩大繁殖的培养基配方，从而实现大量优质种苗快速繁殖，为保存种质资源和规模化生产奠定基础。
关键词：蓝靛果忍冬E8;组织培养;离体快繁体系
基金项目：吉林省大学生创新创业训练计划项目——蓝靛果忍冬种质资源离体快繁研究;吉林省教育厅资助项目——长白山野生蓝靛果忍冬资源优良品种选育及配套栽培技术研究（合同编号：JJKH20180667KJ）
中图分类号： S663 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2019.06.013
蓝靛果忍冬（Loniceraedulis）又名羊奶子、黑瞎子果、山茄子等，其营养丰富，不仅可用来鲜食、加工，还可提取色素，是一种珍稀的浆果资源[1，2]。另外，其嫩枝可入药，清热解毒，果实富含药用保健成分，具有极高的药用价值。因其利用价值颇高，故有“第三代水果”之称，应用前景较好。但对蓝靛果忍冬的探究多集中在营养保健及栽培等方面上[3，4]。而关于蓝靛果忍冬离体快繁方面的报道较少，而该植物实生繁殖较困難，扦插繁殖亦受外界因素影响较大，所以利用植物组织培养技术进行离体快繁是有效的繁育种苗途径。本试验对蓝靛果忍冬E8进行了植物组织培养研究，最终建立了无菌快速繁殖体系。
1材料与方法
1.1初代无菌苗的获得
将吉林农业大学果树基地引进的蓝靛果忍冬优良品种E8半木质化的枝条先进行表面清洗除尘除菌处理，然后将其置于超净工作台上，用0.1%的升汞溶液进行不同时间的消毒，最后无菌水冲洗至少3次以上。再用无菌滤纸吸去表面水分，在无菌纸上将外植体剪截的长度范围是1.5～2cm，接种于事先配制好的，pH值为5.8的MS培养基中（BA2.0mg/L、IBA0.1mg/L，蔗糖和琼脂分别为30g/L和8g/L）。试验设10个处理，每瓶内含1个外植体，1个月前后调查统计培养物生长状况，例如污染、死亡和成活等方面。
1.2 增殖继代培养
本试验设10瓶为一个处理，外植体每瓶接入3个，1个月前后统计污染、增殖及成活。筛选适宜的基本培养基种类试验中，Murashig and Skoog Medium（MS）、1/2Murashig and Skoog Medium（1/2 MS）、GamborgB5 Medium（B5）、CHU （N6） Medium（N6），激素为2.0mg/L-16-苄氨基腺嘌呤（6-BA）和0.1 mg/L吲哚丁酸（IBA）;不同生长素对组培苗增殖的探讨中，MS中加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤，与不同浓度（0.05、0.1、0.2mg/L）的吲哚丁酸、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）形成处理组合;在含有6-苄氨基腺嘌呤2.0mg/L及0.2mg/L吲哚丁酸的MS中，添加不同浓度水平（0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L）的赤霉素（GA3）。
1.3生根培养
每个处理接种10瓶，每瓶接种1～2个无根组培苗，30d左右观察记录组培苗生根率及根生长情况等指标。基本培养基筛选种类设为1/2MS、MS、B5、N6，添加IBA0.6mg/L。不同激素筛选种类设为NAA、IAA和IBA，浓度设为0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L。
1.4培养条件
培养室环境的温度为（25±1）℃，光照的时间为12h/d，光照强度2000 Lx左右。
2 结果与分析
2.1 E8初代无菌苗的获得
外植体消毒时间长短对无菌苗的获得影响差异较大。时间过短（4～6min），外植体污染率较高。培养过程中发现：消毒时间与污染率呈负相关，但与死亡率呈正相关。因此，时间要长短适宜才能成功获得初代培养物。带顶芽嫩梢消毒8min、无顶芽茎段10min较好。
2.2 E8组培苗的增殖
研究发现，B5和N6不适于组培苗的增殖，而在1/2MS培养基中的总体状况稍好，而组培苗在MS培养基中增殖和生长状况最优。
不同激素对组培苗增殖的影响存在差异。NAA利于愈伤组织形成，而对组培苗的进一步分化增殖极为不利。从增殖倍数与长势两方面综合考虑，IAA的适宜浓度是0.1mg/L。IBA对增殖起到的促进作用相对较明显。
在分析GA3对组培苗增殖影响的结果时显示，当GA3的浓度为0.40mg/L时，其增殖倍数较高，芽苗总体长势较优。因此，E8组培苗适宜的增殖配方为MS培养基中添加适宜浓度的赤霉素（0.4mg/L）、6-BA（2.0mg/L）和IBA（0.2mg/L）。
2.3 E8组培苗瓶内生根
在1/2MS培养基中的组培苗生根效果最好，在MS和B5培养基中生根效果欠佳，而在N6中表现最差。组培苗在含有不同浓度NAA中的总体表现是苗基部形成愈伤组织，不利于生根培养，吲哚乙酸对各种质的组培苗生根诱导起到了一定积极影响，但生根率相对低些，IBA浓度为1.0mg/L时，生根率可达100%，因此，生根诱导培养的适宜条件为1/2MS培养基+1.0mg/L IBA。
3结论
本研究经过近一年的试验，成功建立了蓝靛果忍冬E8的离体快速繁殖体系，该试验结果可为蓝靛果忍冬优良品种工厂化快速繁育优质种苗提供科学参考。
参考文献
[1]刘丽华，姜兴明.长白山区蓝靛果经济林的营造技术[J].国土绿化，2014（07）：39.
[2]田新华，吴捷，张建瑛，等.蓝靛果忍冬组织培养研究[J].林业科技，2012，37（06）：7-9.
[3]周丽萍，王化，李梦莎，等.蓝靛果保健功能研究进展[J].国土与自然资源研究，2016（05）：92-95.
[4]王柏林.蓝靛果丰产栽培技术[J].农村实用科技信息，2014（11）：7.
作者简介：王瑞琦，本科生在读，研究方向：果树栽培。
通讯作者：李金英，博士，讲师，研究方向：植物组织培养及资源。
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