改进乳制品中三聚氰胺液相色谱检验方法的研究分析

来源:用户上传      作者:

　　摘 要：三聚氰胺所引发的食品安全问题是有目共睹的，在对其进行检测的过程中，根据国标规定可以采用液相色谱的检定方法。但是规定中的检测方法尤其局限性，因此本文从改进流动相的角度对规范方法进行了改进，并获得了较好的效果。
　　关键词：三聚氰胺 液相检测 改进实验
　　
　　一、三聚氰胺及其检测方法简介
　　三聚氰胺是一种化学物质，其真正的学名为三胺三嗪，也可称之为密胺、氰尿酰胺、三聚酰胺，是一种无色无味的粉末，具体分子为单斜晶体，分子式为C3N6H6，核心的结构为氮环，是一种重要的氮杂环形式的有机化工原料。三聚氰胺中的氮元素含量较高，可以达到三分之二，每增加1%的三聚氰胺在采用凯氏定氮法进行检测的时候，折算出来的蛋白质含量就会虚涨4%，而且其生产成本低廉。基于此种性质，一些生产的厂家将其利用在食品生产中，对蛋白粉、液态奶、奶粉、饲料等进行违法的添加，以此形成蛋白质增高的情况，获得虚假的产品质量信息，从中获得不法利益。在美国就曾经发生过因为三聚氰胺超标的小麦蛋白粉、大米蛋白粉所生产的宠物饲料在使用过程中造成动物死亡的情况。而在2008年我国也应为三聚氰胺的违法添加而出现了奶粉危机，其原因就是婴儿使用了三聚氰胺的奶粉而造成了不良的后果。在随后的检测中，累计检测出因为问题奶粉而导致泌尿系统出现异常的患病儿童多达近三十万。
　　鉴于上面所罗列的三聚氰胺的危害，我国已经出台并制定了一些列对三聚氰胺的检测和管理的规定，以控制在食品中添加三聚氰胺的行为，在《原料乳与乳制品中三聚氰胺的检测方法》这一国家标准中，进一步规定了高效率液相色谱法、气相色-质谱连用的方法、液相色谱与质谱/质谱的三种检测方法为国家认可的乳品中三聚氰胺的检测手段，检测和定量的标准分别为2mg/kg、0.5mg/kg、0.01mg/kg。对食品中所含的三聚氰胺的检测也参考上诉三种方法。在实际中通常是按照国标的基本操作来进行试验和确定检测的结果。
　　二、三聚氰胺的液相色检验方法
　　1材料与方法
　　1）材料
　　（1）仪器：高效液相色谱仪附二极管阵列检测器(沃特斯公司,美国)、色谱柱Kromasil KR100-5C8(250 mm×4.6 mm i.d.,5μm, Eka Chemicals公司,瑞典)超声波清洗仪、离心机、涡旋混合器等。（2）试剂：三聚氰胺标准品(含量99%,购自AJohnsonMatthey Company)、磺基水杨酸(分析纯,北京化学试剂公司)、柠檬酸(分析纯,北京化学试剂公司)、辛烷磺酸钠(色谱用离子对试剂,Dikma公司)、乙腈(色谱纯,TEDIA公司)、盐酸(保证试剂,北京化学试剂公司)。
　　2）分析方法
　　（1）提取：奶粉:称取0.5~3 g试样(精确至0.001 g),加入0.1 mol/L盐酸至15 ml,涡旋混匀,超声提取30 min后加入60 g/L磺基水杨酸3~4 ml,再用0.1 mol/L盐酸定容至20 ml,混匀后以4 000 r/min离心5 min,上清液经0•45μm的微孔滤膜过滤后进样,对于含量较高的样品可稀释至适宜的浓度后进样。鲜奶及酸奶:称取15 g左右试样(精确至0.001g),加入60 g/L磺基水杨酸3~4 ml,再用0.1 mol/L盐酸定容至20 ml,混匀后离心,上清液经0.45μm的微孔滤膜过滤后进样,对于含量较高的样品可稀释至适宜的浓度后进样。
　　（2）高效液相色谱检测条件：二极管阵列检测器波长范围200~400 nm。色谱柱采用KromasilKR100-5C8,(250 mm×4.6 mm i.d.,5μm),柱温为40℃。缓冲液为10 mmol/L柠檬酸与10 mmol/L辛烷磺酸钠混合溶液。流动相为缓冲液+乙腈(85+15,体积比)；流速:1.0 ml/min；进样量:20μl。
　　三、结果与讨论
　　1、校正曲线：
　　用0.1 mol/L盐酸配置0.5、1.0、2.0、6.0、12、120μg/ml系列浓度的三聚氰胺标准溶液,在所选的色谱条件下进样,每个浓度至少重复3次,用所得到的峰面积平均值对进样浓度与峰面积绘制校正曲线。峰面积与质量浓度成正比,线性方程为y=7.02×104x-1.42×104,相关系数r为0.9999。
　　2、方法的检测灵敏度
　　在上述试样处理方法及色谱条件下,根据噪音的10倍确定方法的定量限为
　　1 mg/kg。三聚氰胺标准的紫外光谱图、色谱图及阴性样品与添加样品的色谱图,可以看出,样品无需用固相萃取柱净化,液相色谱分离度较好,无干扰,可直接用于样品的定性和定量分析。
　　3、添加回收率和精密度试验
　　在阴性的奶粉、鲜奶、酸奶样品中分别添加1、5、10 mg/kg的三聚氰胺标准品,按照上述的提取和色谱条件进行测定,每个浓度重复6次,测定结果和相对标准偏差,添加回收率在80%~105%之间,相对标准偏差小于5•24%,结果表明该方法满足分析要求。
　　4、色谱柱及流动相的选择
　　由于考虑到三聚氰胺的极性相对较大,如果选择常用的C18柱可能会造成其难以保留,故选择极性相对较大的C8柱,使得该物质能够得以保留。为使得该物质的色谱行为良好,在流动相中使用辛烷磺酸钠离子对试剂进一步加强其保留特性,以保证良好的分析效果。方法中采用的流动相参考了FCC三聚氰胺测定方法中的流动相条件,由于与杂质的分离良好、保留时间比较合适,分析效果较好故未做调整。
　　四、结论
　　通过实际的检测方法的结果和各个变量曲线的对比，本文采用的高效液相色谱法与NY/T1372―2007标准的方法相比,适用于液态或固态乳及乳制品中三聚氰胺的测定,具有较高的灵敏度与精密度,重复性好,回收率稳定,可作为测定乳与乳制品中三聚氰胺含量的参考。
　　
　　参考文献：
　　[1]喻宏伟.论原奶中三聚氰胺的快速测定[J],食品安全检测，2008（9）.
　　[2]温庆.高效液相色谱快速测定牛奶及奶粉中三聚氰胺[J],现代食品，2009（5）.
　　[3]李玉泉.如何改进液态奶中三聚氰胺的检测方法[J],分析与检测，2009（15）.
　　[4]李建华.固相萃取－离子交换色谱法测定提取物中三聚氰胺[J].分析实验室2008,（10）.

转载注明来源:https://www.xzbu.com/2/view-363273.htm