高效液相色谱法测定橘红痰咳液中柚皮苷的含量

来源:用户上传      作者: 李慧

　　[摘要] 目的 建立测定橘红痰咳液中柚皮苷含量的高效液相色谱（HPLC）法。 方法 色谱柱：Phenomenex-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：甲醇-醋酸-水（38.0∶0.5∶62.0）；检测波长：283 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：40℃。 结果 柚皮苷在89.6～896.0 μg之间，线性关系良好（r = 0.999 9），加样回收率为98.25%，RSD = 1.43%（n = 6）。 结论 该方法操作简便、准确，具有很好的重现性和稳定性，可以用于橘红痰咳液的质量控制。
　　[关键词] 高效液相色谱法；橘红痰咳液；柚皮苷；含量测定
　　[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）02（b）-0110-02
　　
　　Determination of Naringin in Juhongtanke Oral Solution by HPLC
　　LI Hui
　　Department of Pharmacy, Zibo Maternal and Child Health Hospital in Shandong Province, Zibo 255000, China
　　[Abstract] Objective To establish the method for determination of Naringin in Juhongtanke Oral Solution by HPLC. Methods The column employed was Phenomenex-C18 Column (4.6 mm×250 mm, 5 μm); the mobile phase was methanol-acetic acid-water (38.0∶0.5∶62.0); the detection wave length was seted at 283 nm, the flow rate was 1.0 mL/min and the column temperature was 40℃. Results The linear range of Naringin was 89.6-896.0 μg (r = 0.999 9), the mean recovery was 98.25%, RSD = 1.43% (n = 6). Conclusion This method is simple, rapid and accurate with good reproducibility. It is suitable for the quality control of Juhongtanke Oral Solution.
　　[Key words] HPLC; Juhongtanke Oral Solution; Naringin; Determination
　　
　　橘红痰咳液为本院制剂，由化橘红、蜜炙百部、苦杏仁、茯苓、制半夏、五味子、甘草7味药物组成，具有理气祛痰、润肺止咳之功效，用于感冒、支气管炎、咽喉炎引起的痰多咳嗽、气喘等。其中化橘红为君药，柚皮苷为化橘红的主要有效成分之一，参照相关文献[1-6]，本文通过系统的方法学考察，建立了该制剂中柚皮苷的HPLC含量测定方法，并在此基础上测定了柚皮苷的含量。
　　1 仪器与试药
　　1.1 仪器
　　高效液相色谱仪，包括Lab Alliance型恒流泵、Waters966二极管阵列检测器[活德国际贸易（上海）有限公司]、Millennium 32色谱工作站，Phenomenex-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），BP211D型分析天平（德国赛多利斯），FOEA26810D型纯水机（Millipore公司）。
　　1.2 试药
　　柚皮苷对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号：110722-200610），橘红痰咳液样品（自制，批号：100801、100802、100803），缺少化橘红的阴性对照样品（自制）；水为超纯水，甲醇为色谱纯（国药集团化学试剂有限公司），其余试剂均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件
　　色谱柱：Diamosil-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-醋酸-水（38.0∶0.5∶62.0）；检测波长：283 nm；柱温：40℃；流速：1.0 mL/min；理论塔板数按柚皮苷峰计算不低于3 000。
　　2.2 对照品溶液的制备
　　取110℃减压干燥至恒重的柚皮苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含45 μg的溶液，即得。
　　2.3 供试品溶液的制备
　　精密量取供试品1 mL，加甲醇稀释并定容至25 mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
　　2.4 阴性溶液的制备
　　按照供试品溶液的制备方法，取缺少化橘红的阴性对照样品，制备成阴性对照溶液。
　　2.5 干扰试验
　　按照“2.1”项下的色谱条件，吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有色谱峰出现，而阴性对照液无相应峰出现，表明阴性无干扰。见图1。
　　2.6 线性关系考察
　　分别吸取柚皮苷对照品溶液（44.8 μg/mL）2、4、6、8、10、12、16、20 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：Y = 12 162X-27 556，r = 0.999 9。表明柚皮苷在89.6～896.0 μg范围内，峰面积值与进样量（μg）之间线性关系良好。
　　2.7 精密度试验
　　精密吸取柚皮苷对照品溶液（44.8 μg/mL）10 μL，按“2.1”项下色谱条件，重复进样6次，测得柚皮苷峰面积积分值分别为5 400 267、5 413 236、5 440 989、5 455 261、5 454 005、5 411 008，平均5 429 128，RSD ＝ 0.44%（n = 6），表明仪器的精密度良好。
　　2.8 稳定性试验
　　取同一供试液（批号：100801），分别于制备后0、1、2、3、4、5、6 h进样，测得样品中柚皮苷峰面积值分别为4 886 932、4 846 555、4 855 303、4 830 029、4 831 674、4 815 527、4 801 096，平均4 838 159，RSD = 0.58%，表明供试品溶液在制备后6 h内基本稳定。
　　2.9 重现性试验
　　对同一批样品（批号：100801）分别制备6份供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件测定，计算含量分别为0.991、1.003、0.996、1.007、0.992、0.997 mg/mL，平均0.998 mg/mL， RSD = 0.63%（n = 6），表明方法的重现性良好。
　　2.10 加样回收率试验
　　取已知含量的样品6份（柚皮苷含量0.998 mg/mL），分别精密加入柚皮苷对照品0.896 mg，按“2.3”项下供试品溶液制备方法操作，按公式计算回收率，回收率（%）=[测得量（mg）-制剂中含量（mg）]/加入对照品量（mg）×100%。回收率试验结果见表1。
　　
　　表1 回收率试验结果
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　2.11 样品含量测定
　　取三批橘红痰咳液样品，按“2.3”项下供试品溶液制备方法操作，按“2.1”项下色谱条件，依法测定。样品含量测定结果见表2。
　　
　　表2 橘红痰咳液中柚皮苷的含量测定结果（n = 3）
　　
　　
　　
　　
　　
　　3 讨论
　　化橘红是本制剂中的主要药材之一，柚皮苷是化橘红的主要活性成分，具有抗炎、镇痛、抗病毒、抗过敏、抑菌及抑制醛糖还原酶等药理作用[7-8]，为本制剂的主要有效成分之一，因此以柚皮苷含量作为制剂质量控制的指标是较为科学合理的。
　　本试验结果表明，高效液相色谱法测定橘红痰咳液中柚皮苷的含量，操作简便、准确，具有很好的重现性和稳定性，可用于该制剂的质量控制。
　　[参考文献]
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　　（收稿日期：2011-06-27 本文编辑：卫 轲）

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