医院制剂复方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量测定

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　　[摘要] 目的 建立紫外-可见分光光度法测定医院制剂复方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量，以更好地控制该药物质量，保证用药安全。 方法 采用紫外-可见分光光度法，于568 nm波长处测定硫酸卡那霉素的含量。结果 硫酸卡那霉素质量浓度在0.1～0.5 mg/mL范围内与紫外吸收度的线性关系良好（r = 0.9999），平均加样回收率为100.35%，RSD为0.66%（n = 9）。 结论 该方法简便、准确、重现性好，可用于医院制剂复方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量测定。
　　[关键词] 紫外-可见分光光度法；医院制剂；硫酸卡那霉素；含量测定
　　[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2019）04（c）-0109-04
　　Determination of kanamycin sulfate in hospital preparation Compound Diphenhydramine Nasal Drops
　　LIU Min LIU Junli TIAN Jiayi ZENG Weixin
　　Department of Pharmacy， Beijing Shijitan Hospital， Capital Medical University， Beijing 100038， China
　　[Abstract] Objective To establish a method for the determination of kanamycin sulfate in Compound Diphenhydramine Nasal Drops by ultraviolet-visible spectrophotometry so as to better control the quality of the drug and ensure its safety of medication. Methods The content of kanamycin sulfate was determined by ultraviolet-visible spectrophotometry at 568 nm. Results The linear relationship between the concentration of kanamycin sulfate and UV absorbance in the range of 0.1-0.5 mg/mL was good （r = 0.9999）， the average recovery was 100.35%， and the RSD was 0.66% （n = 9）. Conclusion The method is simple， accurate and reproducible. It can be used for the determination of kanamycin sulfate in hospital preparation Compound Diphenhydramine Nasal Drops.
　　[Key words] Ultraviolet-visible spectrophotometry； Hospital preparation； Kanamycin sulfate； Content determination
　　復方苯海拉明滴鼻液是液是北京中医药大学附属护国寺中医医院的传统制剂，主要有效成分为盐酸苯海拉明、盐酸麻黄碱以及硫酸卡钠霉素，辅料为羟苯乙酯和氯化钠，主要用于治疗过敏性鼻炎、鼻窦炎及肥大性鼻炎，具有很好的疗效。然而，其质量标准中只有盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱的含量测定[1]，未对硫酸卡那霉素的含量进行控制，不能全面地评价该制剂的质量。为保证用药安全，依据《北京市医疗机构化学制剂质量研究技术指导原则》[2]，本研究建立了复方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量测定方法。2015年版《中华人民共和国药典》（二部）[3]中采用高效液相蒸发光检测法测定硫酸卡那霉素的含量，但该方法所需要使用的仪器设备昂贵，且对操作要求较高，不利于医院制剂的快速分析。本研究参考2014年版《北京市医疗机构制剂规程》（第一册）[4]，建立了硫酸卡那霉素紫外-可见分光光度的含量测定方法，该方法操作简便、重现性良好、结果可靠，可用于复方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量测定。
　　1 仪器与试剂
　　UV2401紫外-可见分光光度仪（日本岛津公司）、BT125D十万分之一电子分析天平（赛多利斯公司）、S220型酸度计（瑞士梅特勒公司）、电热恒温水浴锅（上海赫田科学仪器有限公司）。
　　复方苯海拉明滴鼻液（首都医科大学附属北京世纪坛医院制剂室制备；批号分别为：20171101、20171102、20171103）、复方苯海拉明滴鼻液阴性样品（首都医科大学附属北京世纪坛医院制剂室制备）、硫酸卡那霉素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：96066，纯度为99.96%）。
　　乙醇、茚三酮、乙酸、乙酸钠等试剂均为分析纯，实验用水为纯化水。
　　2 方法与结果
　　2.1 溶液制备
　　2.1.1 茚三酮溶液 精密称取水合茚三酮1.0000 g，用无水乙醇溶解后，置100 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，即得10.0 g/L的茚三酮溶液；避光低温保存，现配现用。
　　2.1.2 乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH 5.4） 称取50.0 g乙酸钠（CH3COONa·3H2O）于烧杯中，加入150 mL纯化水，用移液管移取2.50 mL冰醋酸，加热溶解，冷却后转移到250 mL容量瓶中，加水定容至刻度，即得。 　　2.1.3 羟苯乙酯贮备液 精密称定羟苯乙酯对照品3.00 mg，置于10 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
　　2.1.4 供試品贮备液 精密称定硫酸卡那霉素对照品适量，分别置100 mL容量瓶中，再精密称定氯盐酸苯海拉明1.25 mg，盐酸麻黄碱10.00 mg，氯化钠7.00 mg，精密吸取羟苯乙酯贮备液1.00 mL，置于该容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
　　2.1.5 供试品溶液 精密吸取复方苯海拉明滴鼻液5.00 mL，置于100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，即得。
　　2.1.6 硫酸卡那霉素对照品溶液 精密称定硫酸卡那霉素对照品适量，加水溶解并定容稀释制成每1 mL含硫酸卡那霉素0.25 mg的溶液，即得。
　　2.1.7 阴性对照溶液 按处方比例制备不含硫酸卡那霉素的阴性样品，并从中精密量取5.00 mL，置于100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，即得。
　　2.2 检测方法
　　精密吸取供试品溶液1.00 mL置于25 mL比色管中，分别加入1.00 mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH 5.4）和1.00 mL茚三酮溶液（10.0 g/L），混匀后于沸水浴中加热20 min，冷却至室温后，用水定容至刻度线，混匀，静置15 min，于568 nm波长处测定其吸光度。
　　2.3 检测波长的选择
　　取上述制备好的供试品溶液及阴性对照溶液，分别在550～650 nm进行扫描，硫酸卡那霉素对照品溶液在568 nm波长处有较大吸收；阴性对照溶液在550～650 nm无明显的紫外吸收。该制剂中所含其他药物及辅料在568 nm波长处对硫酸卡那霉素的紫外吸收无干扰。故选择568 nm处为硫酸卡那霉素的检测波长。见图1。
　　2.4 标准曲线绘制
　　取硫酸卡那霉素对照品适量，按照“2.1.6”项下方法制备成1 mg/mL的硫酸卡纳霉素对照品储备液，分别精密吸取上述溶液1、2、3、4、5 mL，置于10 mL容量瓶中，按“2.1.6”项下方法制备一系列浓度梯度的对照品溶液，并按照“2.2”项下检测方法测定其吸光度。以硫酸卡那霉素的浓度为横坐标（X），吸光度为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得到硫酸卡那霉素回归方程：Y=2.091X-0.048（r = 0.9999）。硫酸卡那霉素在0.1～0.5 mg/mL与吸光度线性关系良好。
　　2.5 精密度试验
　　取“2.1.6”项下硫酸卡那霉素对照品溶液，按照“2.2”项下检测方法测定其吸光度，连续测定6次。其吸光度的RSD值为0.57%（n = 6），表明仪器精密度良好。
　　2.6 稳定性试验
　　取复方苯海拉明滴鼻液（批号：20171101）适量，按“2.1.5”项下方法制备一系列浓度梯度的供试品溶液，于阴凉处密闭放置，分别于30、60、90、120、150、180 min按照“2.2”项下检测方法测定其吸光度。其吸光度的RSD为1.32%，提示供试品溶液在阴凉处密闭放置3 h内基本稳定。
　　2.7 重复性试验
　　取同一复方苯海拉明滴鼻液（批号：20171102）6份，按“2.1.5”项下方法制备供试品溶液，按照“2.2”项下检测方法测定其吸光度，连续测定6次。其吸光度的RSD值为0.76%，提示该方法的重复性良好。
　　2.8 加样回收率试验
　　取含量的已知复方苯海拉明滴鼻液（批号：20171 102）适量，参考2015年版《中华人民共和国药典》（四部，通则9101）[3]，并加入取样量中硫酸卡那霉素含量的80%、100%、120%的硫酸卡那霉素对照品，每个浓度各3份，按照“2.1.5”项下供试品溶液制备方法制备，按照“2.2”项下检测方法测定其吸光度，计算硫酸卡那霉素的含量及其回收率。硫酸卡那霉素的平均加样回收率为100.35%，RSD值为0.66%，提示该方法准确性良好。见表1。
　　2.9 含量测定
　　取3批复方苯海拉明滴鼻液（批号：20171101、20171102、20171103），分别按“2.1.5”项下方法制备供试品溶液，按照“2.2”项下检测方法测定其吸光度，计算硫酸卡那霉素的含量。3批样品中硫酸卡那霉素的含量分别为5.1204、5.0876、5.1765 mg/mL，分别为标示量的102.05%、101.75%、103.53%。
　　3 讨论
　　原复方苯海拉明滴鼻液的质量标准中只有盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱的含量测定，未对硫酸卡那霉素的含量进行控制。硫酸卡那霉素是临床上常用的一种氨基糖苷类的光谱抗生素[5]，具有很好的水溶性，其性质稳定，价格低廉，对大多数革兰阴性菌，如大肠埃希菌、沙门菌、变形杆菌、多杀性巴氏杆菌等，有较强的抗菌作用[6-7]。硫酸卡那霉素也具有一定的毒性，不但有可能使机体产生过敏反应，而且浓度过高时，也对神经系统、肾脏系统产生毒性[8-9]。因此，对制剂中的硫酸卡那霉素的含量进行控制，具有十分重要的意义，有助于保证药品质量，确保用药安全。
　　相关文献中记载的硫酸卡那霉素的含量测定方法有微生物法[10]、酶联免疫法[11]、高效液相蒸发光检测法[12-13]、旋光法[14]、荧光法[15]、紫外-可见分光光度法[16]、电化学法[17]等。考虑到医院药检室设备条件有限[18]，本研究建立了紫外-可见分光光度法测定复方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量。紫外-可见分光光度法操作简单、分析成本低、准确度高、快速且易于推广[19]，适用于医院制剂的快速检测。
　　本研究建立的硫酸卡那霉素的含量测定方法，虽然参考了2014年版《北京市医疗机构制剂规程》（第一册）[4]中的硫酸卡那霉素的含量测定方法，但由于处方中的其它药物及辅料成分有了很大的变化，因此本研究重点考察了组方中盐酸苯海拉明、盐酸麻黄碱及其它辅料成分对硫酸卡那霉素含量测定的影响。本研究阴性对照品溶液在568 nm处无紫外吸收，故排除了该制剂中其它成分的干扰。 　　此外，2014年版《北京市医疗机构制剂规程》（第一册）[4]中的硫酸卡那霉素的含量测定方法的前處理采用盐酸苯肼溶液，其与硫酸卡那霉素反应生成络合物，在可见光区出现明显的褪色峰，利用褪色峰的吸光度与硫酸卡那霉素浓度的相关性，测定硫酸卡那霉素的含量[20]。茚三酮是一种用于检测或者一级胺以及二级胺的试剂[21]。硫酸卡那霉素中含有较多的氨基，茚三酮与氨基酸机构中的氨基作用可发生显色反应，其方法更为简便、反应灵敏、显色速度快，所需试剂较为廉价，故本研究选用茚三酮作为显色剂。
　　综上，本研究建立了紫外-可见分光光度法以测定医院制剂复方苯海拉明滴鼻液中的硫酸卡那霉素含量。该方法方法操作简便、分析速度快、结果准确、重现性好，可为复方苯海拉明滴鼻液的质量评价提供依据。
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　　（收稿日期：2018-08-15 本文编辑：王 蕾）
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