观察P16蛋白和TCT及HPV基因分型联合检测在宫颈病变筛查中的应用效果

来源:用户上传      作者:

　　【摘要】 目的 观察P16蛋白和液基薄层细胞学检测（TCT）及人乳头瘤病毒（HPV）基因分型或高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）联合检测在宫颈病变筛查中的应用效果。方法 559例宫颈病变患者， 均应用病毒学联合细胞学进行检查。对比其诊断效果， 选出最有意义的方式。结果 患者经检查后可知， HPV分型阳性+TCT异常、HR-HPV阳性+TCT异常、HPV分型阳性+P16TCT异常、HR-HPV阳性+P16TCT异常为宫颈病变的好发人群， 应用P16TCT+HPV分型对高度宫颈上皮内瘤变（CIN）的检出率更高（48.33%）。结论 宫颈疾病人群中， HPV感染率较高， 且以高危型、单一和二重感染居多;随着宫颈病变程度的加重， HPV的感染率和P16蛋白阳性表达率逐渐升高。采用P16TCT+HPV分型在宫颈病变筛查中的筛查效果略优于其他方式。
　　【关键词】 P16蛋白;液基薄层细胞学检测;人乳头瘤病毒基因分型;联合检测;宫颈病变;筛查
　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.21.090
　　宫颈病变是临床妇科科室中经常遇到的疾病， 其中像慢性宫颈炎等都有可能导致宫颈病变的发生。其中最值得警惕的情况便是宫颈上皮内病变， 该症状与宫颈癌存在直接联系， 即为宫颈癌的癌前病变， 若不尽早对宫颈上皮内病变进行确诊并治疗， 则可能会发展为宫颈癌， 对患者的生命安全造成重大威胁[1]。有关患者宫颈病变的检查， 现今主要采用病毒学和细胞学联合检查， 其中病毒学包括HPV分型检查与HR-HPV检查， 细胞学则包括普通TCT与P16蛋白表达-TCT（P16TCT）联合检查， 以上诊断方式虽能够起到较好的检出作用， 但也存在一定差异[2]。本研究对4种不同的检测方式进行分析和对比， 以选出最具有价值的检测方式， 研究流程及结果如下。
　　1 资料与方法
　　1. 1 一般资料 选取559例本院于2018年1月～2020年1月收治的宫颈病变患者， 为其提供4种联合检测方式， 以上患者中选择TCT+HPV分型的有331例、TCT+HR-HPV的有156例、P16TCT+HPV分型的有60例、 P16TCT+HR-HPV的有19例， 其中7例患者同时选择TCT+HPV分型、TCT+HR-HPV检查。患者年龄25～77岁， 平均年龄（48.31±9.72）岁。纳入患者经TCT诊断后病症分级均为意义不明的不典型鳞状细胞（ASC-US） 及以上。该研究已通过医院伦理委员会批准、所有患者均已签署知情同意书。
　　1. 2 方法
　　1. 2. 1 仪器及试剂 美国ABI-2720 PCR仪及系统、潮州凯普生物化学有限公司HBHM-9000A组合型分子杂交仪， 广州江元医疗科技有限公司全自动细胞免疫标记染色系统（ICC）JY-6000;HPV基因分型试剂由凯普生物提供， P16蛋白试剂、TCT试剂由江元医疗提供。
　　1. 2. 2 TCT检查 患者入院后立即应用宫颈刷插入其宫颈管中大概1 cm位置处， 绕顺时针的方向旋转大概5～6圈， 对宫颈外口和宫颈管处被刷下来的脱落细胞进行收集， 并将细胞置入保存液当中， 应用TCT制片机制片， 并用浓度为95%酒精进行固定， 完成染色。
　　1. 2. 3 P16蛋白表达检测 采用JY-6000系统制作液基薄片， 95%酒精温室固定72 h， 晾干。将每张液基薄片划分为两半， 一半做P16蛋白表达检测， 另一半作阴性对照。采用免疫组化 Elivision法检测P16蛋白的表达， 并按照试剂盒说明书进行相关操作。
　　1. 2. 4 HPV基因分型检测 同1.2.2采集样本完毕立即放入保存液中， 裂解后提取DNA， 试剂盒购自潮州凯普生物化学有限公司， 采用ABI-2720 PCR仪， 以细胞内基准物质β-globin DNA为对照， 在4种荧光检测通道下， 同步进行聚合酶链反应（PCR）扩增与导流杂交基因分型检测， 根据系统自带软件对结果进行分析。操作及结果判读参考试剂盒说明书。
　　本次研究为其提供4种联合检测方式， 分别为TCT+HPV分型、TCT+HR-HPV、P16TCT+HPV分型、P16TCT+HR-HPV， 患者按照自己意愿自行选择检测方式， 并对联合检测方式进行分析。
　　1. 3 判定標准 根据国际癌症协会2006年制定的TBS分级系统对TCT异常患者进行分级， 分级标准按照从轻至重的顺序分为正常范围（WNL）， ASC-US， 低级别鳞状上皮内病变（LSIL）， 不典型鳞状细胞、不除外高级别鳞状上皮内病变（ASC-H）， 高级别鳞状上皮内病变（HSIL）以及宫颈癌（SCC）;P16TCT结果判定方式：P16蛋白表达阳性（细胞核或细胞质内出现棕黄色颗粒， 每一玻片随机观察10个视野， 阴性细胞（-）未被着色或着色不明显;阳性细胞（+）着色较深， 多以黄棕色为主）或TCT异常定义为P16TCT异常。
　　1. 4 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件进行统计分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
　　2 结果
　　2. 1 4种检测方案CIN敏感度对比 纳入患者采用TCT+HPV分型检测的共有331例， 其中检测出高度CIN的患者有142例， 占总监测患者数的42.90%;采用TCT+ HR-HPV检测的共有156例， 其中检测出高度CIN的患者有63例， 占总监测患者数的40.38%;采用P16TCT+HPV分型检测的共有60例， 其中检测出高度CIN的患者有29例， 占总监测患者数的48.33%;采用P16TCT+ HR-HPV检测的共有19例， 其中检测出高度CIN的患者有9例， 占总监测患者数的47.37%。4种检测中P16TCT+HPV分型检测的高度CIN检出率最高， 4种检出率对比， 差异无统计学意义（P>0.05）。 　　2. 2 TCT+HPV分型检测中不同结果CIN敏感度 TCT+
　　HPV分型检测的患者中， 测出HPV分型阳性+TCT异常的患者共180例， 其中高度CIN 87例， 占该类患者的48.33%;HPV分型阴性+TCT异常的患者共16例， 其中高度CIN 4例， 占该类患者的25.00%;HPV分型阳性+TCT正常的患者共117例， 其中高度CIN 49例， 占该类患者的41.88%;HPV分型阴性+TCT正常的患者共18例， 其中高度CIN 2例， 占该类患者的11.11%。
　　2. 3 TCT+HR-HPV检测中不同结果CIN敏感度 TCT+
　　HR-HPV检测的患者中， 测出HR-HPV阳性+TCT异常的患者共88例， 其中高度CIN 40例， 占该类患者的45.45%;HR-HPV阴性+TCT异常的患者共9例， 其中高度CIN 1例， 占该类患者的11.11%;HR-HPV阳性+TCT正常的患者共50例， 其中高度CIN 21例， 占该类患者的42.00%;HR-HPV阴性+TCT正常的患者共9例， 其中高度CIN 1例， 占该类患者的11.11%。
　　2. 4 P16TCT+HPV分型检测中不同结果CIN敏感度
　　P16TCT+HPV分型检测的患者中， 测出HPV分型阳性+
　　P16TCT异常的患者共39例， 其中高度CIN 22例， 占该类患者的56.41%;无HPV分型阴性+P16TCT异常的患者， 高度CIN占比为0;HPV分型阳性+P16TCT阴性的患者共20例， 其中高度CIN 7例， 占该类患者的35.00%;HPV分型阴性+P16TCT阴性的患者共1例， 无高度CIN患者， 占该类患者的0。
　　2. 5 P16TCT+HR-HPV检测中不同结果CIN敏感度
　　P16TCT+HR-HPV检测的患者中， 测出HR-HPV阳性+
　　P16TCT异常的患者共14例， 其中高度CIN 6例， 占该类患者的42.86%;无HR-HPV阴性+P16TCT异常的患者， 高度CIN占比为0;HR-HPV阳性+P16TCT阴性的患者共5例， 其中高度CIN 3例， 占该类患者的60.00%;無HR-HPV阴性+P16TCT阴性的患者， 高度CIN占比为0。
　　3 讨论
　　宫颈癌属于常见的妇科恶性肿瘤， 发病初期表现形式为普通妇科疾病， 晚期会通过淋巴或直接蔓延的方式进行转移引起患者肾功能衰竭， 进而引发诸多恶性并发症， 多年来致死率居高不下， 严重威胁患者的生命安全[3]。
　　对于宫颈癌目前没有一个确切的治疗方案， 只有对该病早期发现、早期诊断， 给予积极的治疗， 阻断其向癌变的方向发展， 才能有效阻止宫颈癌的发生发展。早期对宫颈病变患者的检查常用巴氏涂片细胞学检查法， 通过该方式来对患者CIN分级进行诊断， 但由于在细胞涂片、标本采集不纯等因素， 导致其对CIN的灵敏度较差， 在很多情况下检出率达不到预期目标。有关CIN的检查， 常用TCT及P16蛋白表达技术， 该技术能够有效排除宫颈管处粘液、杂质、血细胞等的影响， 使得诊断的结果受到干扰的情况更少， 不仅能提高诊断的准确率， 还能有效地将患者按照病症程度进行分级。陆晓青等[4]研究提示， P16蛋白阳性表达与CIN分级密切相关， P16蛋白阳性表达率随CIN分级越高而升高。宫颈癌组织中P16蛋白的阳性表达率高达 89.66%， P16蛋白可作为评价宫颈癌患者病情和预后的有效指标[5]。虽说TCT， P16蛋白表达具有较高的泛用性和灵敏度， 但该方法主要是采集患者脱落细胞进行检查， 而脱落细胞和活体细胞之间可能存在差异， 使得在最终的诊断符合率上存在出入。
　　有关宫颈病变的病毒学检查主要是以HPV为主， 通过取患者宫颈处分泌物进行检测， 并根据其HPV的感染率来推断患者病变程度， 但以实际操作表现上看， 因HPV已被鉴定出高达100种以上的亚型， 导致在检测过程中特异性和灵敏度表现不够理想， 且不便于对HPV进行分型[5]。
　　目前各大医院医护人员主张在对TCT、P16蛋白表达检查为阳性的患者进一步开展检查， 因此可联合以上两种方式对患者开展检查， 从而弥补两种检测方式的不足， 提高患者的检出率。同时两种检测还能够细分为更加有效的方式， 能使检测的灵敏度更高。
　　经本次研究可知， HPV阳性+TCT异常、HR-HPV阳性+TCT异常、HPV阳性+P16阳性、HR-HPV阳性+P16TCT异常为宫颈病变的好发人群， 应用P16TCT+HPV分型对高度CIN的检出率更高（48.33%）。
　　综上所述， 宫颈疾病人群中， HPV感染率较高， 且以高危型、单一和二重感染居多;随着宫颈病变程度加重， HPV的感染率和P16蛋白表达率逐渐升高。采用P16TCT+HPV分型在宫颈病变筛查中筛查效果略优于其他方式。
　　参考文献
　　[1] 唐恒锋， 卢红琼， 唐文. P16蛋白和TCT及HPV基因分型联合检测在宫颈病变筛查中的应用. 浙江预防医学， 2014， 26（12）：
　　89-91.
　　[2] 徐惠昌， 骆婧. HPV基因检测联合TCT检查在宫颈癌筛查及病理分型中应用观察. 甘肃科技纵横， 2018， 47（1）：94-96
　　[3] 刘洪波， 祁晓莉， 乔星， 等. HPV分型检测联合TCT检查在宫颈病变筛查中的应用. 医学信息， 2018， 31（8）：160-161， 164.
　　[4] 陆晓青， 陈洁瑛， 朱晓萍， 等. 液基薄层细胞学及荧光定量聚合酶链反应技术与P16蛋白联合检查在宫颈癌早期诊断的研究. 中华医院感染学杂志， 2015（7）：1478-1480.
　　[5] 李伟英， 范长玲， 张敏， 等. p16蛋白在宫颈癌中的表达及其与患者临床特征和预后的关系. 癌症进展， 2019， 17（10）：1222-1224， 1240.
　　[收稿日期：2020-03-30]
转载注明来源:https://www.xzbu.com/6/view-15286874.htm