CMV IgM抗体检测及IgG抗体亲和力分析对CMV原发性感染的诊断意义

来源:用户上传      作者:孙健

　　 【摘要】 目的：探讨巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）IgM抗体检测及IgG抗体亲和力分析对CMV原发性感染的意义。方法：选取2017年1-12月在本院80例CMV感染患者的临床资料进行回顾性分析。采集所有患者的血清标本，经间接免疫荧光法检测CMV IgG抗体，采用免疫捕获法检测CMV IgM，分析CMV IgG抗体亲和力。结果：所有患者的CMV IgG检测均为阳性，且稀释度在1︰1 022～1︰14。其中40例CMV IgM抗体为阴性，40例CMV IgM抗体为阳性。CMV IgM阴性与阳性者AI值与CMV IgG抗体亲和力比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：在对CMV原发性感染诊断过程中，大部分CMV IgM抗体阳性者并非近期原发性感染，不能根据单一的血清学检测进行诊断，CMV IgM抗体检测联合IgG抗体亲和力分析有助于对CMV原发性感染确诊。
　　 【关键词】 巨细胞病毒 原发性感染 CMV IgM CMV IgG抗体亲和力
　　 Significance of IgM Antibody Detection and IgG Antibody Affinity Analysis in the Diagnosis of Primary Infection of CMV/SUN Jian. //Medical Innovation of China， 2020， 17（22）： -122
　　 [Abstract] Objective： To explore the significance of IgM antibody detection and IgG antibody affinity analysis in the diagnosis of primary infection of cytomegalovirus （CMV）. Method： The clinical data of 80 patients with CMV infection in our hospital from January to December 2017 were retrospectively analyzed. Serum samples were collected from all patients， CMV IgG antibody was detected by indirect immunofluorescence method， and CMV IgM was detected by immunocapture method， and the CMV IgG antibody affinity was analyzed. Result： CMV IgG was positive in all patients， and the dilution was 1︰1 022-1︰14. Among them， 40 cases were negative for CMV IgM antibody and 40 cases were positive for CMV IgM antibody. The AI values and CMV IgG antibody affinity of CMV IgM negative and positive patient were compared， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion： In the diagnosis of CMV primary infection， most of the patients with positive CMV IgM antibody were not recently infected and could not be diagnosed based on a single serological test. CMV IgM antibody detection combined with IgG antibody affinity analysis is helpful for the diagnosis of primary CMV infection.
　　 [Key words] Cytomegalovirus Primary infection CMV IgM CMV IgG antibody affinity
　　 First-author’s address： Heilongjiang Jiamusi Maternal and Child Health Hospital， Jiamusi 154004， China
　　 doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.22.031
　　 臨床治疗中，巨细胞病毒（CMV）属一种疱疹类病毒，该病毒的感染情况在人群中较为常见，大多为隐匿性感染，临床特征相对较少，新生儿、孕妇以及免疫力较为低下者极易出现CMV感染的情况，对其身体健康产生严重影响[1-2]。由于大部分CMV感染者并无显著的临床特征，因此仅靠症状对患者的病情进行判定具有一定的困难。在孕期，尤其孕早期若出现CMV感染，则会对胎儿生长发育情况造成严重影响，该阶段是胎儿器官以及神经系统发育的重要时期，极易导致后遗症出现[3-4]。在临床治疗中，对CMV活动性感染或近期感染主要通过CMV IgM抗体进行判定，而对于CMV原发性感染或长时间持续存在的IgM抗体等情况则不能够进行准确判定[5]。近年来相关研究显示，CMV原发性感染可通过进行CMV IgG抗体亲和力的分析而进行有效评估与判定。低亲和力抗体大多与近3个月内原发性感染的情况存在一定的相关性，而高亲和力抗体则能够有效排除近期原发性感染的存在情况[6]。本研究探讨了CMV IgM抗体检测及IgG抗体亲和力分析对CMV原发性感染的诊断意义，现报道如下。 　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料 选取2017年1-12月于本院就诊以及住院的CMV感染的80例患者的临床资料进行回顾性分析。纳入标准：所有患者的临床资料均较为完整;疑似CMV感染并经检测CMV IgG抗体存在血清学转换或CMV IgG、CMV IgM检测结果为阳性;排除标准：患有严重的感染性或者免疫性疾病者;患有精神类疾病或者认知功能障碍不能配合本研究者;中途退出本研究者。所有患者中男43例，女37例，年龄26～65岁，平均（45.1±3.2）岁;所有患者及家属均知情同意并签署知情同意书，本研究已经医院伦理委员会批准。
　　1.2 方法
　　1.2.1 标本采集 于清晨抽取所有患者5 mL的空腹静脉血，经10 min离心后取其血清待测。
　　1.2.2 免疫荧光法检测CMV IgG抗体 利用CMVAD169感染的人胚肺成纤维细胞进行相应的胰酶消化，并将相应的细胞核进行纯化，然后在其中加入1/3正常的HEp-2细胞核，为内参阴性的参照对比;在印制28孔的孔片中将上述细胞悬液放入其中并进行滴涂，待干燥后采用丙酮进行15 min的固定。对血清标本进行稀释后将抗原片滴入其中，之后将其置于37 ℃的环境中进行30 min的孵育，进行PBS冲洗后，加入Evans蓝稀释并带有荧光标记的IgG抗体内，同样在37 ℃的环境中进行孵育30 min，再次进行PBS冲洗，用甘油封片，并放置于显微镜下进行观察。若细胞核呈肾形并且為翠绿色则为CMV感染阳性，同时存在小而圆的HEp-2细胞核未存在荧光染色。
　　1.2.3 免疫捕获法检测CMV IgM抗体 检测原理为抗IgM μ链捕获酶联免疫吸附测定（ELISA），CMV IgM抗体检测的试剂盒由意大利DiaSorin公司提供，分别抽取所有患者的空腹静脉血，经离心后将其血清分离，然后按照1︰101的比例进行稀释，并将100 μL稀释液加入含有IgM μ链抗体的96孔板中，在温育60 min之后进行洗涤酶标板，然后采用辣根过氧化物酶标记的抗CMV抗体以及CMV抗原的混合物加入其中，再进行温育60 min。采用底物溶液在其洗涤后进行显色，30 min后终止操作。采用酶标仪读取吸光度值（OD值），当标本OD值/界限值孔的OD值后，若所得结果<0.9则为阴性，>1.1表示为阳性，当检测的结果处于两者之间时，则需进行再一次检测。
　　1.2.4 CMV IgG抗体亲和力分析 按照1︰101稀释后的100 μL标本置入带有CMV抗原的微孔板内，每个标本均加两孔，并在室温中进行30 min的孵育;洗液洗板1次后，将200 μL的尿素加入标本孔内。另一孔采用PBS进行参照，之后同样置于室温中，10 min后进行3次洗板，并将100 μL的辣根过氧化物酶标记的第2抗体混合物加入其中，经30 min的室温孵育之后洗板3次，然后将100 μL的TMB底物加入其中，在室温内放置15 min后将450/620 nm的终止液加入其中并进行相应的比色实验。亲和力指数（AI）=经尿素处理标本孔的OD值/未经尿素处理标本孔的OD值，所得结果若<30%则为低亲和力抗体，在30%～60%则为中等亲和力抗体，>60%则为高亲和力抗体。
　　1.3 统计学处理 采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验，等级资料比较采用秩和检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 CMV IgG抗体、IgM抗体OD值及AI值 所
　　有患者的CMV IgG检测均为阳性，且稀释度在1︰1 022～1︰14。40例CMV IgM抗体为阴性，AI值54%～95%，平均（79.3±6.4）%。40例CMV IgM抗体为阳性，AI值5.1%～99.1%，平均（61.7±5.9）%。两者AI值比较，差异有统计学意义（t=12.788，P<0.05）。40例CMV IgM抗体阳性的IgM抗体OD值及AI，见表1。
　　2.2 CMV IgM阴性与阳性者亲和力比较 40例CMV IgM阴性者中，2例（5.0%）IgG抗体为中等亲和力抗体，38例（95.0%）IgG抗体为高亲和力抗体。40例CMV IgM阳性中，9例（22.5%）IgG抗体为低亲和力抗体;4例（10.0%）IgG抗体为中等亲和力抗体;27例（67.5%）IgG抗体为高亲和力抗体。CMV IgM阴性与阳性者CMV IgG抗体亲和力比较，差异有统计学意义（Z=5.416，P<0.05）。
　　3 讨论
　　 人类在感染CMV后大多不会出现任何症状，属于亚临床感染的一种，在全球范围内均有发生，且无任何季节性，感染率相对较高[7]。CMV出现原发性感染后，大多在内皮细胞、白细胞以及机体组织中进行潜伏。CMV感染通过对机体产生有效刺激进而致使CMV IgM抗体的产生，而CMV IgG抗体大约会在2周之后出现，CMV IgM抗体则会缓慢消失，部分患者CMV IgM抗体消失的时间会存在显著延长的情况，因此，对患者在进行病情判定的过程中若单凭CMV IgM抗体进行CMV原发性感染的检测，则容易导致误诊的情况出现，并且不利于是否为近期感染的情况进行有效判定[8-10]。抗体亲和力主要是指CMV IgG抗体与其抗原进行有效结合的能力，通过对亲和力进行有效评估能够对患者感染的时间进行大致判定。若机体内存在相对较低的亲和力抗体，则表明患者感染的时间大约发生在3～5个月之内，若患者机体内的亲和力抗体相对较高，则患者大约在几个月或者几年之内存在感染[11-12]。CMV IgG抗体亲和力较高且IgM为阳性则表明患者存在远期CMV感染的状况，患者的机体内会具有IgM抗体持续存在的情况[13]。本研究40例CMV IgM阳性者中，有9例CMV IgG抗体为低亲和力，说明为近期巨细胞病毒感染。4例CMV IgG抗体为中等亲和力，并且其中有1例经检测其效价能够达到1︰1 022，与此同时，在临床中存在发热的情况，经过与临床的诊断结果进行合理分析显示，该患者存在近期原发性感染的状况;此外其余的3例患者则并未出现血清学变化的状况，也并为存在较为显著的临床症状，因此并不能排除远期感染的情况。在进行临床诊断的过程中，虽然部分患者具有感染的情况，但由于其CMV感染的症状并未存在特异性，致使不能够将其与其他基础类的疾病进行有效区分。虽然其CMV IgM抗体显示为阳性，但仍有持续存在的CMV IgM抗体或者复发感染的可能[14]。对于存在自身免疫类疾病但身体状况表现较为正常或者免疫力相对正常者而言，当CMV IgM抗体持续存在或复发感染的情况出现时，并不会存在任何的临床特征[15-16]。有关研究中表明，AI值为30%是CMV IgG抗体亲和力有效判定的临界点，CMV IgG抗体亲和力分析具有相对较高的敏感度，甚至能够达到100%，而特异度也在84.5%以上，仅从CMV IgG抗体检测或者CMV IgM抗体检测均不能够对CMV感染的情况进行有效判定[17-18]。本研究中显示，在40例CMV IgM抗体为阳性的患者中，CMV IgG抗体低亲和力占比相对较低，仅为22.5%（9/40），而高亲和力为67.5%（27/40）占比相对较高，其中仅有4例患者表现为中等亲和力抗体。依据国内外有关研究表明，大部分CMV IgM抗体显示为阳性的患者均不是近期产生的CMV，需经CMV IgG抗体亲和力评估进而判断其是否存在近期原发性CMV感染的情况[19-20]。目前临床诊断中，对于CMV病原学的检查较为缺乏，因此，不能够单凭血清学的检测对患者的诊断结果进行评估，应通过CMV IgM抗体检测及IgG抗体亲和力分析对CMV感染情况进行有效评估，可在提高检测结果的准确性的同时对患者目前的情况做出准确判定。 　　 综上所述，在CMV原发性感染诊断过程中，大多数存在CMV IgM抗体阳性的患者并非是近期的原发性感染，并不能根据单一的血清學检测进行判定及诊断，应联合IgM抗体检测与IgG抗体亲和力分析。
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　　（收稿日期：2019-12-19） （本文编辑：田婧）
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